+7 495 120-13-73 | 8 800 500-97-74

(для регионов бесплатно)

Содержание

LADA в Город русских машин

LADA в Город русских машин — официальный дилер где купить Лада ВАЗ в Санкт-Петербурге

 


«Город русских машин» — официальный дилер крупнейшего производителя легковых автомобилей в России и Восточной Европе АО «АВТОВАЗ».

Мы осуществляем продажу и техническое обслуживание автомобилей LADA на выгодных для вас условиях. В нашем дилерском центре вы можете купить автомобиль в кредит или за наличный расчет, воспользоваться системой трейд-ин или приобрести транспортное средство в лизинг.

У нас представлен весь модельный ряд марки LADA:  LADA VESTA, LADA XRAY, LADA 4×4, LADA Largus и LADA Granta. Предварительно познакомиться с любой из моделей можно на тест-драйве.

К вашим услугам — сервисная зона, оборудованная в соответствии со всеми стандартами  и требованиями АО «АВТОВАЗ». Мы проводим все виды гарантийного и постгарантийного обслуживания и ремонта, в том числе кузовной и малярный, устанавливаем дополнительное оборудование.

Всегда в наличии – запасные части и аксессуары в широком ассортименте.

Планируете приобретение автомобиля или ищете качественный сервис? Приезжайте в «Город русских машин»!

Ждем вас ежедневно с 9.00 до 21.00 по адресу: г. Санкт- Петербург, ул. Руставели, д.27. Тел. +7 (812) 331 03 32   

 

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований.

Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований.

Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Отправляя сообщение, я выражаю свое согласие и разрешаю ПАО «АВТОВАЗ», а также, по их поручению, третьим лицам осуществлять обработку моих персональных данных (фамилия, имя, отчество, год, месяц, дата и место рождения; адрес, номер паспорта и сведения о дате выдачи паспорта и выдавшем его органе; образование, профессия, место работы и должность; домашний, рабочий и мобильный телефоны; адрес электронной почты и другие данные, требуемые для отправки сообщения), включая сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение, использование, распространение (в том числе трансграничную передачу), обезличивание, уничтожение персональных данных), в целях связанных с возможностью предоставления информации о товарах и услугах, которые потенциально могут представлять интерес, а также в целях сбора и обработки статистической информации и проведения маркетинговых исследований.

Согласие на обработку персональных данных в соответствии с указанными выше условиями я предоставляю на 10 (десять) лет. Я уведомлен и согласен с тем, что указанное согласие может быть мной отозвано посредством направления письменного заявления заказным почтовым отправлением с описью вложения, либо вручено лично под подпись.

Билеты на домашние матчи Хоккейного клуба СКА и команд СКА-Нева, СКА-1946, СКА-Варяги

  • 23 / чт / 19:30

    СКА

    Салават Юлаев

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    менее 250 билетов

    Купить билет
  • 26 / вс / 13:00

    СКА-Варяги

    МХК Динамо СПб

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 27 / пн / 19:00

    СКА-Варяги

    МХК Динамо СПб

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 28 / вт / 19:00

    СКА-1946

    Крылья Советов

    Хоккейный город, Российский пр.

    , д.6

    Вход свободный

  • 29 / ср / 19:00

    СКА-1946

    Крылья Советов

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 29 / ср / 19:30

    СКА

    Трактор

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Купить билет
  • 30 / чт / 19:00

    СКА-Нева

    Омские крылья

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 01 / пт / 19:00

    СКА-Варяги

    МХК Спартак

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 02 / сб / 17:00

    СКА-Нева

    Металлург

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 03 / вс / 13:00

    СКА-Варяги

    МХК Спартак

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 03 / вс / 17:00

    СКА

    Нефтехимик

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Купить билет
  • 04 / пн / 17:00

    СКА-Нева

    Ермак

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 05 / вт / 19:00

    СКА-Варяги

    Академия Б.П. Михайлова

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 05 / вт / 19:30

    СКА

    Локомотив

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Купить билет
  • 06 / ср / 13:00

    СКА-Варяги

    Академия Б.П. Михайлова

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 06 / ср / 19:00

    СКА-Нева

    Сокол

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 11 / пн / 19:00

    СКА-Варяги

    Тайфун

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 12 / вт / 19:00

    СКА-Варяги

    Тайфун

    Хоккейный город, Российский пр. , д.6

    Вход свободный

  • 13 / ср / 19:30

    СКА

    Динамо Мск

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 15 / пт / 19:00

    СКА-Варяги

    Сахалинские Акулы

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 16 / сб / 13:00

    СКА-Варяги

    Сахалинские Акулы

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 17 / вс / 17:30

    СКА

    Барыс

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 18 / пн / 19:00

    СКА-1946

    Амурские Тигры

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 19 / вт / 19:00

    СКА-1946

    Амурские Тигры

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 19 / вт / 19:30

    СКА

    Йокерит

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 21 / чт / 19:30

    СКА

    Куньлунь

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 22 / пт / 19:00

    СКА-Нева

    Ижсталь

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 24 / вс / 17:00

    СКА-Нева

    Нефтяник

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 26 / вт / 19:00

    СКА-Нева

    Молот

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 28 / чт / 19:00

    СКА-Нева

    Торос

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 01 / пн / 19:00

    СКА-Нева

    Динамо СПб

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 02 / вт / 19:30

    СКА

    Металлург Мг

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 04 / чт / 19:30

    СКА

    Спартак

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 06 / сб / 13:00

    СКА-Варяги

    Русские Витязи

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 07 / вс / 13:00

    СКА-Варяги

    Русские Витязи

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 10 / ср / 13:00

    СКА-Варяги

    ХК Капитан

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 10 / ср / 19:00

    СКА-1946

    ХК Рига

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 11 / чт / 13:00

    СКА-Варяги

    ХК Капитан

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 11 / чт / 19:00

    СКА-1946

    ХК Рига

    Хоккейный город, Российский пр. , д.6

    Вход свободный

  • 15 / пн / 19:00

    СКА-Варяги

    СКА-1946

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 16 / вт / 19:00

    СКА-Варяги

    СКА-1946

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 17 / ср / 19:30

    СКА

    Локомотив

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 19 / пт / 19:00

    СКА-Варяги

    МХК Динамо

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 19 / пт / 19:30

    СКА

    Сибирь

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 20 / сб / 13:00

    СКА-Варяги

    МХК Динамо

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 26 / пт / 19:00

    СКА-Нева

    Горняк-УГМК

    Хоккейный город, Российский пр. , д.6

    Вход свободный

  • 28 / вс / 17:00

    СКА-Нева

    Зауралье

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 29 / пн / 19:30

    СКА

    Северсталь

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 30 / вт / 19:00

    СКА-Нева

    Южный Урал

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 01 / ср / 19:30

    СКА

    Динамо Мн

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 02 / чт / 19:00

    СКА-Нева

    Челмет

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 03 / пт / 19:30

    СКА

    Йокерит

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 10 / пт / 19:00

    СКА-Нева

    Химик

    Хоккейный город, Российский пр. , д.6

    Вход свободный

  • 12 / вс / 17:00

    СКА-Нева

    ХК Рязань

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 12 / вс / 17:00

    СКА

    Динамо Мск

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 18 / сб / 13:00

    СКА-1946

    СКА-Варяги

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 19 / вс / 13:00

    СКА-1946

    СКА-Варяги

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 20 / пн / 19:30

    СКА

    Спартак

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 22 / ср / 19:30

    СКА

    ЦСКА

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 25 / сб / 13:00

    СКА-1946

    МХК Динамо СПб

    Хоккейный город, Российский пр. , д.6

    Вход свободный

  • 26 / вс / 13:00

    СКА-1946

    МХК Динамо СПб

    Хоккейный город, Российский пр., д.6

    Вход свободный

  • 07 / пт / 17:00

    СКА

    Торпедо

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 09 / вс / 17:00

    СКА

    ЦСКА

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 11 / вт / 19:30

    СКА

    Ак Барс

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 13 / чт / 19:30

    СКА

    ХК Сочи

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 17 / пн / 19:30

    СКА

    Авангард

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 26 / сб / 17:00

    СКА

    Динамо Рига

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д. 1

    Билетов нет

  • 28 / пн / 19:30

    СКА

    Витязь

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • 12 / чт / 19:30

    тестовое яндекс

     

    Ледовый дворец, пр. Пятилеток д.1

    Билетов нет

  • КриптоПро | Приобретение

    Юридические лица

    Данная форма заказа предназначена для юридических лиц, индивидуальных предпринимателей, нотариусов, адвокатов, управляющих и др. категорий лиц, осуществляющие оплату с расчетного счета, открытого в банке.

    Физические лица

    Данная форма заказа предназначена для физических лиц, осуществляющих оплату с банковской карты, принадлежащей данному лицу.

    ВАЖНО: При получении счёта на физическое лицо и оплаты его с расчетного счёта юридического лица или индивидуального предпринимателя данный платеж не будет принят и счёт будет перевыставлен согласно номенклатурных позиций, доступных в форме заказов для юридических лиц.

    Иностранные физические лица

    По вопросам оформления договорных взаимоотношений на приобретение продуктов и услуг компании КриптоПро, обращайтесь по телефону: +7 (495) 995-48-20

      Обращаем ваше внимание, что  продукцию компании КриптоПро Вы можете приобрести на территории своего региона у наших дилеров. Список дилеров приведен в разделе Партнёры/Дилеры.  


        О лицензировании использования продуктов КриптоПро

        • Продукты КриптоПро представляют собой лицензии на право использования программного обеспечения, оформленные на бумажном носителе формата А4, дистрибутивы, сертификаты на техническую поддержку.
        • Передача прав на использование программного обеспечения на основании лицензионного договора (соглашения) не облагается налогом на добавленную стоимость (основание пп. 26 п. 2 ст. 149 Налогового Кодекса РФ.
        • Права распространения прав использования продуктов (лицензий) КриптоПро передаются дилерам на основании лицензионных (дилерских) договоров, заключаемых в письменном виде.
        • Права распоряжения и пользования продуктами КриптоПро передаются покупателям на основании лицензионного договора (соглашения), в форме договора присоединения в соответствии с нормами статьи 428 Гражданского Кодекса РФ. Условия договора присоединения изложены на сайте.
        • О лицензировании программного обеспечения КриптоПро IPsec.

        Windows 10 — Microsoft Store Россия

        Windows 10

        Получите новую улучшенную систему Windows, обновив свою версию до Windows 10. Вы тут же обнаружите, что система знакома пользователям Windows; однако она реализует более индивидуальный подход и выводит все, что вам нравится в предыдущих версиях (Windows 7 и 8), на совершенно новый уровень.

        Windows 10 предлагает еще более удобное меню «Пуск», расширяя возможности и делая любимые приложения и вкладки доступнее, чем когда-либо. Эта система не только прекрасно помогает справляться с несколькими задачами сразу, но также совместима с имеющимися программами и оборудованием и повышает вашу продуктивность. Например, вы сможете одновременно просматривать до четырех приложений и все выполняемые задачи.

        После обновления до Windows 10 ваши приложения будут идеально работать в любом режиме на всех устройствах с поддержкой Windows. Загляните в Microsoft Store — и вы найдете множество потрясающих устройств, которые безупречно работают с новейшей версией Windows.

        Windows 10 позволяет наладить безупречную связь с устройствами, что заметно помогает в работе и в играх. Получите великолепные приложения (Почта, Календарь, Музыка, Видео, Карты и т. д.) в стандартном пакете Windows 10 и создавайте резервные копии важных сведений с помощью OneDrive. А если вы любите игры, вам понравится возможность синхронизировать устройства Windows 10 с Xbox Live, чтобы записывать прохождения всего за пару секунд. Так вы сможете выполнять потоковую передачу игр с консоли Xbox One на устройство в любом уголке вашего дома — и многое другое! Приобретая Windows 10, вы обретаете большую гибкость, чем когда-либо.

        Если вы уже используете Windows, скачайте обновление до Windows 10, чтобы опробовать наши новейшие технологии.

        Если вы работаете с большими данными, создаете объемные графические файлы, редактируете видео или пользуетесь CAD-приложениями (системы автоматизированного проектирования), Windows 10 Pro для рабочих станций — это ваш выбор. Эта операционная система предназначена для исследователей, инженеров, видеоредакторов, графических художников и специалистов, работающих с большими данными. Система хранит и передает файлы быстрее и даже находит и устраняет ошибки данных. Кроме того, она быстра, надежна и производительна: раскрывает весь потенциал компьютерных компонентов нового поколения и обеспечивает защиту серверного уровня.

        [1] Требуется специальное оборудование, в том числе сканер отпечатков пальцев, инфракрасный датчик с подсветкой или другие биометрические датчики и поддерживающие устройства.

        [2] Для использования Windows Mixed Reality требуются совместимые ПК с Windows 10 и гарнитура, а также Windows 10 Fall Creators Update; аппаратные требования ПК для приложений, функций и контента могут различаться.

        [3] Требуется ПК с поддержкой сенсорного ввода, перо может продаваться отдельно.

        [4] Требуются оборудование 4K и поддерживаемые игры.

        [5] Office продается отдельно.

        [6] Кортана доступна не во всех регионах. Функциональность зависит от вашего региона и используемого устройства.

        [7] Клиент Hyper-V требует 64-разрядной системы с возможностями трансляции адреса второго уровня (SLAT) и 2 ГБ ОЗУ дополнительно.

        Страница не найдена

        Москва и Московская обл.Санкт-Петербург и Лен. обл.Алтайский крайАмурская областьАрхангельская областьАстраханская областьБелгородская областьБрянская областьВладимирская областьВолгоградская областьВологодская областьВоронежская областьЕврейская автономная областьЗабайкальский крайИвановская областьИркутская областьКабардино-Балкарская РеспубликаКалининградская областьКалужская областьКамчатский крайКарачаево-Черкесская РеспубликаКемеровская областьКировская областьКостромская областьКраснодарский крайКрасноярский крайКрымКурганская областьКурская областьЛипецкая областьМагаданская областьМурманская областьНенецкий автономный округНижегородская областьНовгородская областьНовосибирская областьОмская областьОренбургская областьОрловская областьПензенская областьПермский крайПриморский крайПсковская областьРеспублика АдыгеяРеспублика АлтайРеспублика БашкортостанРеспублика БурятияРеспублика ДагестанРеспублика ИнгушетияРеспублика КалмыкияРеспублика КарелияРеспублика КомиРеспублика Марий ЭлРеспублика МордовияРеспублика Саха (Якутия)Республика Северная Осетия-АланияРеспублика ТатарстанРеспублика ТываРеспублика ХакасияРостовская областьРязанская областьСамарская областьСаратовская областьСахалинская областьСвердловская областьСмоленская областьСтавропольский крайТамбовская областьТверская областьТомская областьТульская областьТюменская областьУдмуртская РеспубликаУльяновская областьХабаровский крайХанты-Мансийский автономный округЧелябинская областьЧеченская РеспубликаЧувашская РеспубликаЧукотский автономный округЯмало-Ненецкий автономный округЯрославская область

        МоскваАпрелевкаБалашихаБронницыВереяВидноеВолоколамскВоскресенскВысоковскГолицыноГородской округ ЧерноголовкаДедовскДзержинскийДмитровДолгопрудныйДомодедовоДрезнаДубнаЕгорьевскЖуковскийЗарайскЗвенигородИвантеевкаИстраИстра-1КашираКашира-8КлимовскКлинКоломнаКоролевКотельникиКрасноармейскКрасногорскКраснозаводскКраснознаменскКубинкаКуровскоеЛикино-ДулевоЛобняЛосино-ПетровскийЛуховицыЛыткариноЛюберцыМожайскМытищиНаро-ФоминскНогинскОдинцовоОжерельеОзерыОрехово-ЗуевоПавловский ПосадПересветПодольскПротвиноПушкиноПущиноРаменскоеРеутовРошальРузаСергиев ПосадСергиев Посад-7СерпуховСнегириСолнечногорскСолнечногорск-2Солнечногорск-25Солнечногорск-30Солнечногорск-7Старая КупавнаСтупиноТалдомФрязиноХимкиХотьковоЧерноголовкаЧеховЧехов-2Чехов-3Чехов-8ШатураЩелковоЭлектрогорскЭлектростальЭлектроуглиЮбилейныйЯхрома

        Выбрать

        куп.

        Герои вики | Фэндом

        Фильм

        Куп впервые появляется в фильме, возводя заграждение, которое Хот Род игнорирует и уничтожает. Куп позже спасает Хот Рода и Уитвики от Десептикона Блитцвинга.

        Позже Хот Род и Куп врезаются в океан на планете Квинтесса. Он попадает в плен к гигантскому механическому кальмару, которого затем атакует и побеждает Хот Род. На Квинтессе он использует универсальное приветствие, когда сталкивается с враждебными инопланетными роботами-трансформерами. Хотя в данном случае уловка не удалась, она оставила неизгладимое впечатление на Хот Род, который позже использовал его на планете Джанк.Пара попадает в плен и встречает Краникса, который рассказывает им о Юникроне, которого вскоре вынимают и бросают в бассейн, полный шарктиконов. Судьба, которая позже постигает Купа и Хот Род, которые сбегают, создав водоворот, тем самым избегая судьбы Краникса.

        На протяжении всего фильма у Купа есть анекдот для каждой ситуации, хотя при виде Юникрона, атакующего Кибертрона, он утверждает, что «никогда раньше не видел ничего подобного». Вместе со Спрингером и Арси он борется с внутренней защитой Юникрона, пока Хот Род не высвободит силу Матрицы лидерства автоботов, уничтожив Несущего Хаос.Увидев, что Хот Род стал Родимусом Праймом, Куп заявляет: «Я знал, что у тебя был потенциальный парень», поскольку новый лидер Автоботов привел его и других к побегу из Юникрона, когда он взорвался.

        Сезон 3

        Куп вернется к Квинтессе несколько месяцев спустя, когда он, Ультра Магнус и Спайк Уитвики похищены Квинтессонами. Куп и другие сбежали с помощью ударной силы Родимуса Прайма незадолго до того, как планета была уничтожена Квинтессонами.

        Расследуя крушение шаттла, Куп определил, что корабль был разорван кристаллами смерти монстра, известного как Хаос.Куп столкнулся с Хаосом много лет назад на родном мире существа, планете Дредд. Во время предыдущего визита Куп был схвачен и порабощен; он едва сбежал, но оставил других рабов, чтобы спастись. Куп возглавил команду автоботов на планету Дредд для расследования, но обнаружил, что десептиконы строили новое супероружие, используя кристаллы. В ходе миссии Куп снова столкнулся с Хаосом и на этот раз освободил рабов. Когда Хаос был побежден и рабы были освобождены, десептиконы покинули планету, и темная часть прошлого Купа была искуплена.

        Куп продолжал играть ключевую роль на протяжении 3 сезона, работая директором по безопасности. Он наблюдал за Родимусом Праймом как за своего рода отцом, отмечая, что у нового лидера автоботов были те же проблемы роста, что и у его предшественника, Оптимуса Прайма. Когда Родимус чувствовал себя подавленным требованиями руководства, Куп описывал это как гири — «тяжелейшее бремя», и что Оптимусу нужно было научиться справляться и уважать.

        Куп был среди автоботов, раненых Суперионом во время вспышки чумы ненависти.После того, как Оптимус Прайм был возрожден, Куп был среди команды автоботов, которые присоединились к экспедиции в Чаар, чтобы восстановить металл, разработанный Докторами. Морган и Своффорд, ранее похищенные Гальватроном, были невосприимчивы к чуме. Куп выиграл время для Оптимуса и Небесной Рыси, чтобы сбежать с металлом, прежде чем сам заразился чумой. Куп, как и все остальные, кто был инфицирован, впоследствии был излечен силой Матрицы.

        Сезон 4

        В сезоне 4, Куп он становится Targetmaster с Nebulon по имени Recoil.

        Директора школы

        В эксклюзивной японской серии Headmasters события The Rebirth игнорируются, и Куп так и не стал Targetmaster, вместо этого оставив Кибертрона с Родимусом Праймом и Blurr, чтобы найти новый родной мир для автоботов.

        Директора школы

        Примечание: серия Headmasters рассказывается в сериале для США и упоминается в комиксах Великобритании, что указывает на то, что эти события происходят независимо от временной шкалы.

        Куп был частью группы автоботов, служивших под командованием Фортресс Максимус на Кибертроне.Когда Фортресс Максимус устал от войны с десептиконами и решил, что им следует удалиться на планету Небулос. Куп согласился сопровождать его, но был готов применить силу против атакующих Небуланцев, пока Максимус не остановил его. После этого он сдал свое оружие в знак мира.

        Поскольку Фортресс Максимус и большая часть его старшего персонала добровольно дезактивировали себя, Куп взял на себя ведущую роль в создании базы автоботов на неиспользуемом болоте. После того, как десептиконы пришли на планету и захватили автоботов-хедмастеров, Куп был среди тех, кто был повышен до Targetmaster, чтобы попытаться остановить контроль Скорпонока и лорда Зарака над планетой.Их первая битва была частично успешной, но Автоботы отступили, поняв, что они разрушают область, которую пытались защитить, и вскоре после этого обе фракции покинули Небулос.

        Трансформеры Marvel (Великобритания)

        События, увиденные в британских комиксах, изначально рассматриваются как окончательное будущее сериала, пока путешествие во времени не переписывает временную шкалу, чтобы стать потенциальным будущим.

        В какой-то момент во время войны Купу диагностировали боевую усталость, и он уволился из автоботов, бесцельно дрейфуя на космическом корабле.Он закончил тем, что пошел на помощь Хот-Род, когда он увидел, что он подвергается нападению со стороны тироксианцев, но отказался помочь ему спасти его друга Бларра, только предложив ему подвезти обратно к Кибертрону. Когда Хот Род отправился спасать Бларра в одиночку, Куп пошел за ним и спас пару, решив, что автоботам он все-таки нужен.

        В 2003 году Куп якобы получил задание передать планы города автоботов правительству Земли. По пути на него напали Stunticons, которые украли ленту.Хот Род был тяжело ранен во время неудачной попытки вернуть его, после чего Куп объяснил, что запись была фальшивкой, чтобы убедить десептиконов, что они знают секреты города.

        Во время событий Трансформеры: Фильм , Куп, Хот Род и Бларр были манипулированы Юникроном, чтобы они вернулись во времени, чтобы остановить вмешательство Гальватрона в прошлое (вытеснив Шоквейв и других десептиконов в подвешенное состояние). Они объединились с Ультра Магнусом той эпохи и устроили изощренный обман, взорвав пушку Гальватрона, а затем используя запись и перекрашенный Скайварп, чтобы убедить его, что виноват Старскрим.Гальватрон в гневе разорвал «Старскрим» на части, оставив его убежденным, что он был в альтернативном прошлом, и заставив его вернуться в будущее. Куп и другие вернули настоящий Старскрим в стазис перед тем, как снова уйти.

        После поражения Гальватрона и Юникрона Куп помог Родимусу Прайму сразиться с восставшими десептиконами на Кибертроне. Когда они узнали, что Гальватрон снова в прошлом Земли, вместе с охотником за головами Смертельной Головой, они двое отправились обратно с Бларром и Крушением Гара.Они снова объединились с Ультра Магнусом вместе с Голдбагом и попытались вернуть Гальватрона в их собственное время. Однако им это не удалось, и им удалось забрать только Смертельную Голову.

        Когда Десептиконы, которыми манипулирует Юникрон, начали тотальную атаку на Автоботов на Кибертроне, Куп и Ультра Магнус возглавили защиту, в то время как Родимус Прайм отправился в Джанк, чтобы остановить Юникрона. Позже он сопровождал Родимуса Прайма на Землю, чтобы отразить атаку Квинтессона.

        Куп позже был частью команды, которую Родимус Прайм взял обратно в прошлое, чтобы, наконец, вернуть Гальватрона и остановить временную бурю, угрожающую уничтожить Землю, хотя он настаивал на том, чтобы использовать Арси и Красное оповещение, чтобы сначала остановить Саундвейв и террорконов, истощающих энергию Земли.Их путешествие в прошлое привело к тому, что Бластер и несколько других автоботов оказались в подвешенном состоянии, что сделало автоботов той эпохи подозрительными по отношению к ним. Куп в итоге подвергся нападению со стороны Гримлока, который не узнал его, пока наконец не было объявлено перемирие. Две группы автоботов вместе с союзниками-десептиконами вместе сражались с Гальватроном. Куп был нокаутирован Мегатроном, но снова встал на ноги, чтобы присоединиться к другим автоботам и вернуться в будущее после того, как временная трещина была окончательно закрыта.

        Однако их вмешательство в прошлом изменило историю: Гальватрон никогда не путешествовал во времени и привел десептиконов к возвращению большей части Кибертрона.Автоботам мешал тот факт, что Родимус Прайм содержал Юникрон в Матрице, и Гальватрон чуть не заставил его впасть в ярость берсерка и освободить его. Автоботы решили эвакуироваться на Землю, но их корабль был саботирован, и потребовалось некоторое время, прежде чем Куп понял, что виновником был сам Родимус Прайм, теперь одержимый Юникроном. Когда корабль потерпел крушение, и Родимус прорвался через команду корабля и персонал Автоботов, Куп отказался санкционировать применение смертоносной силы и сумел оторвать Матрицу от Родимуса, временно разорвав связь.Позже он присутствовал при выпуске Unicron.

        Трансформеры Marvel (США)

        После того, как Небуланские автоботы достигли Земли, Фортресс Максимус был бинарно связан со Спайком Уитвики. Куп не доверял своему новому лидеру и настаивал на том, чтобы Таргетмастеры возглавили попытку спасти брата Спайка Бастера от десептиконов Крысолова. Они были отброшены обороной, оставив Фортресс Максимус наедине с собой. Хотя им это и не удалось, ему и Спайку удалось победить Шоквейв, завоевав уважение Купа.Позже он присутствовал, когда их группа присоединилась к земным автоботам на Луне.

        После событий Underbase Saga, в результате которых большинство старых автоботов было деактивировано, Куп стал одним из старших сотрудников Оптимуса Прайма. Он был оставлен ответственным за Ковчег, когда Оптимус взял большую часть команды, чтобы остановить воздушный патруль, атакующий базу ВВС Макдилл. Куп был сбит патрулем спортивных автомобилей и, выздоровев, обнаружил, что Блэкджек закладывает бомбу. Он не смог его обезвредить и не хотел эвакуироваться, оставив на борту десятки автоботов в стазисе.Рэтчет предоставил решение, доставив бомбу на базу Мегатрона, очевидно убив их обоих.

        Куп наткнулся на Гримлока, удаляющего тела Диноботов, как часть своего плана по их оживлению с помощью нуклона, и не смог его остановить. Куп стал все более спорить с Оптимусом Праймом. Когда они вытащили Рэтчета из нулевого пространства только для того, чтобы обнаружить, что он слился с Мегатроном, Куп выступил за убийство получившегося существа, но Оптимус отверг его, разделив их и поместив в стазис.Куп не согласился с тем, что Оптимус Прайм сдал свою команду Скорпоноку, чтобы заключить союз против Юникрона, ударил Апфейса, когда его насмешки стали слишком сильными, и его нужно было убедить присоединиться к Оптимусу Прайму и Хот Роду в шараде, призванной заставить Скорпонока доверять им.

        Когда десептиконы Шоквейва атаковали базу, Оптимус оставил Купа, чтобы сдержать возникшую в результате битву между двумя фракциями десептиконов, и ему удалось заставить Майндвайп использовать свои гипнотические способности, чтобы принудительно прекратить огонь.Затем группа была доставлена ​​на Кибертрон, где Куп принял участие в битве с Юникроном. Выжив, он и другие автоботы последовали за десептиконами до Кло, где Гримлок привел их в засаду. Куп снова оказался среди выживших и сумел присоединиться к Оптимусу Прайму в обращении десептиконов в бегство.

        Поколение 2

        Regeneration One

        Отвергнутый участник торгов за Koffee Kup и Vermont Bread борется за прекращение продажи

        Пекарня Koffee Kup Bakery у завода Vermont Bread Company в Браттлборо, 27 апреля 2021 года.Фото Кевина О’Коннора / VTDigger

        Отвергнутый участник торгов прекращает судебную тяжбу, чтобы остановить неожиданную продажу в последнюю минуту недавно закрытой пекарни Koffee Kup и ее дочерней компании, Vermont Bread Co., базирующейся в Джорджии компании Flowers Foods, производителю таких национальных брендов, как Wonder, стоимостью 4 миллиарда долларов. Хлеб.

        East Baking Company of Massachusetts публично сомневается в том, что продажа компании Flowers Foods, самопровозглашенной как «одного из крупнейших производителей упакованных хлебобулочных изделий в Соединенных Штатах», является нарушением федерального закона Клейтона, который запрещает слияния и поглощения, которые « может существенно снизить конкуренцию »и Антимонопольный закон Шермана против монополий.

        Но после консультации с юристами компания Bay State больше не будет оспаривать продажу в суде.

        «Мы решили отступить», — заявил в понедельник официальный представитель East Baking Джефф МакКэрролл. «Мы не видели пути вперед через судебные разбирательства».

        Около 150 рабочих Koffee Kup в Берлингтоне и 100 рабочих Vermont Bread в Браттлборо были удивлены 26 апреля, обнаружив, что их производственные и распределительные предприятия внезапно закрылись без объяснения причин, в результате чего судья Верховного суда округа Читтенден назначил управляющего Рональда Теплицкого из New York’s Next Point LLC. продать активы.

        Среди нескольких участников тендера компания East Baking вышла на передний план 6 мая, когда она запросила и получила первоначальное разрешение штата на выделение до 2,4 млн долларов в рамках программы поощрения роста занятости штата Вермонт для перезапуска заводов.

        Три недели спустя крупнейшая семейная пекарня в Атлантике в Канаде, Mrs. Dunster’s, 27 мая получила по той же программе до 1,8 миллиона долларов, всего за несколько часов до того, как она объявила, что является «предпочтительным покупателем» получателя.

        Но обе компании были удивлены 7 июня, когда получатель передумал и вместо этого наградил пекарни Вермонта компанией Flowers Foods, чьи бренды также включают Sunbeam и Tastykake.

        Получатель и его адвокат еще не ответили на запросы VTDigger о комментариях. Но Flowers Foods выпустила пресс-релиз, в котором говорится, что, даже с «сильным потребителем в регионе», у компании «нет ближайших планов по открытию» заводов в Берлингтоне или Брэттлборо.

        Этот ответ вызвал гнев покупателей, мечтающих о том, чтобы Koffee Kup и Vermont Bread повторно наняли рабочих и вернули местную выпечку на полки магазинов.

        Миссис Данстер еще не сообщила о своих дальнейших действиях.

        Адвокат Koffee Kup, со своей стороны, подал экстренное ходатайство о немедленном раскрытии закрытой информации.

        «Компании Koffee Kup не могут участвовать в конструктивных обсуждениях распределения любых излишков доходов без предварительного знания и полного понимания условий продажи», — написала в своем ходатайстве адвокат Burlington Александра Эдельман.

        «Получатель, как должностное лицо, назначенное судом и находящееся под контролем суда, не имеет полномочий сохранять конфиденциальность информации о продаже», — продолжил Эдельман.«Скорее, получатель должен обеспечивать прозрачность».

        Хотите быть в курсе последних деловых новостей? Подпишитесь здесь, чтобы получать еженедельную рассылку по электронной почте обо всех отчетах VTDigger о местных компаниях и экономических тенденциях. И ознакомьтесь с нашим новым бизнес-разделом здесь.


        Хлебобулочная Koffee Kup успешно продана AIAC

        КЛИЕНТ

        Koffee Kup Bakery («ККБ» или «Компания») — производитель хлебобулочных изделий, в том числе хлеба, пончиков и английских кексов, который поставляет продукцию крупным клиентам в Северо-Восточном и Среднеатлантическом регионах.Компания распространяет свою продукцию в более чем 4500 точек доставки, поддерживаемых дистрибьюторской сетью, состоящей из 135 маршрутов.

        ПОЛОЖЕНИЕ

        Пекарня

        Koffee Kup Bakery, основанная в 1940 году, продемонстрировала огромный рост в 2013 году благодаря приобретению Vermont Bread Company. Компания находится в процессе изменения положения своего бизнеса, чтобы извлечь выгоду из привлекательной платформы, состоящей из устоявшихся брендов, партнерских отношений с частными торговыми марками, долгосрочных отношений с крупными розничными торговцами и обширной дистрибьюторской сети.Компания искала финансового партнера для ускорения следующего этапа роста и прибыльности. KKB — один из крупнейших работодателей в штате Вермонт, в трех пекарнях: Brattleboro, VT; 500 сотрудников; Берлингтон, VT; и Норт-Гросвенор-Дейл, штат Коннектикут.

        ОБЯЗАТЕЛЬСТВО

        G2 Capital Advisors, LLC («G2») выступала в качестве эксклюзивного финансового консультанта KKB, руководя целенаправленными и эффективными усилиями продавца, направленными на поиск оптимального партнера для поддержки долгосрочной стратегии роста компании.G2 и Компания поддерживали долгосрочные отношения до заключения сделки, в том числе G2 предоставляла финансовые консультации и поддержку в области управления ликвидностью.

        РЕЗУЛЬТАТ

        Koffee Kup Bakery успешно завершила сделку с American Industrial Acquisition Corporation («AIAC») 1 апреля 2021 года. AIAC имеет значительный опыт партнерства с производственными и торговыми предприятиями и имеет хорошие возможности для продолжения расширения KKB, извлекая выгоду из операционных улучшений и ускорение темпов роста.

        «До сделки G2 выполняла функции финансового консультанта ККБ. Их глубокое знание потребностей компании и критериев акционеров позволило G2 найти наиболее подходящего для нового инвестора. После того, как наши акционеры выбрали правильного инвестора для сотрудничества, G2 приложила все усилия для своевременного завершения сделки. В конце концов, работа, проделанная G2, соответствовала критериям, изложенным в LOI, и способствовала приходу нового инвестора с глубокими связями в отрасли Вермонта.Завершение этой сделки, безусловно, будет способствовать развитию KKB в интересах всех его сотрудников, а также финансовых партнеров и поставщиков », — сказал Хуберт Обери, владелец KUPCO

        .

        «Успех этой сделки — фантастический пример работы с нынешним мажоритарным акционером, KUPCO, который предан своим сотрудникам. Владельцы и команда менеджеров KKB понимали, что для того, чтобы вывести свою компанию на новый уровень, им нужен партнер, который будет не только оказывать финансовую поддержку, но и иметь опыт работы на руководящем уровне.Благодаря стремлению AIAC не только предоставлять немедленное вливание капитала, но и расширять возможности кредитования, KKB и AIAC совместно выявят существенные операционные улучшения и, в конечном итоге, максимально увеличат потенциал роста компании », — сказал Пэт Рейнхардт, управляющий директор G2.

        О пекарне Koffee Kup:

        KKB — ведущий производитель и дистрибьютор фирменных хлебобулочных изделий. Компания производит 325 наименований хлеба, булочек, английских маффинов и пончиков, которые доставляет в более чем 4500 пунктов доставки через свою дистрибьюторскую сеть, управляемую Компанией.Компания продает свои ведущие бренды по всему Северо-Востоку и может похвастаться разнообразной и постоянной базой, насчитывающей более 1000 клиентов.

        О компании American Industrial Acquisition Company:

        Инвестиционная компания American Industrial Acquisition Corporation, основанная в 1996 году, расположена в Нью-Йорке, штат Нью-Йорк. Фирма стремится инвестировать в производственную, аэрокосмическую, автомобильную, грузовую, железнодорожную, бытовую, энергетическую, горнодобывающую, нефтегазовую, упаковочную, целлюлозно-бумажную, медицинскую и фармацевтическую отрасли.

        О компании G2 Capital Advisors

        G2 Capital Advisors предоставляет консультационные услуги по слияниям и поглощениям, рынкам капитала и реструктуризации для среднего рынка. Мы предлагаем интегрированные, многопрофильные и отраслевые услуги, объединяя опытных руководителей высшего звена со специализированными инвестиционными банкирами. Мы стремимся быть надежным советником для наших клиентов, включая корпорации и институциональных инвесторов.

        КОНТАКТЫ ПО ДАННОЙ СДЕЛКЕ:

        Пэт Рейнхардт, управляющий директор: T: 508.287.7065 Эл. Почта: [email protected]

        Майкл Уильямс, директор по вопросам промышленности и производства: T: 917.523.2164 E: [email protected]

        Мэтью Болл, сотрудник: T: 978.914.4421 E: [email protected]

        Уилл Лютмер, юрист: T: 857.449.0236 E: [email protected]

        Эван Карлсон, старший аналитик: T: 775.445.0677 E: [email protected]

        границ | Неравномерное разнообразие белков HAK / KUP / KT среди покрытосеменных: распределение видов и перспективы

        Введение

        Калий является важным макроэлементом для растений, составляющим до 2–7% от общей сухой массы растения (Evans and Sorger, 1966; Leigh and Wyn Jones, 1984).Он выполняет ряд важных функций, таких как активация ферментов, нейтрализация отрицательных зарядов и, более конкретно для растений, поддержание тургора клеток, что приводит к росту растений и перемещению органов (Marschner, 2012). Будучи сидячими организмами, растениям необходимо поглощать K + из почвы. В первую очередь это достигается за счет клеток эпидермиса и коры корня. Затем K + загружается в стелу, транспортируется к побегу и распределяется по листьям (Ahmad and Maathuis, 2014; Wigoda et al., 2014). Транспорт калия на короткие и дальние расстояния включает перемещение K + через клеточные мембраны, особенно через плазматическую мембрану, что во многих случаях происходит при резких градиентах концентрации (например, на границе раздела корень-почва). У растений существует пять основных мультигенных семейств, которые кодируют проницаемые для K + транспортные системы: (i) шейкер-подобные каналы K + , (ii) тандемно-поровые каналы K + (TPK), ( iii) переносчики HAK / KUP / KT, (iv) переносчики HKT и (v) катион-протонные антипортеры (CPA; Mäser et al., 2001). Они стали основой транспортного инструментария K + во время эволюции наземных растений из-за их широкого присутствия в различных линиях наземных растений (Gomez-Porras et al., 2012).

        Здесь мы сосредоточены на семействе транспортеров HAK / KUP / KT (High-Affinity K + / K + UPtake / K + Transporter). Растительные переносчики HAK / KUP / KT были впервые идентифицированы у ячменя и Arabidopsis (Quintero and Blatt, 1997; Santa-María et al., 1997; Фу и Луан, 1998; Kim et al., 1998) на основании их гомологии с бактериальными переносчиками KUP и грибковыми HAK (Schleyer, Bakker, 1993; Bañuelos et al., 1995). Из-за различных сокращений, использованных в этих ранних отчетах, составное название HAK / KUP / KT широко используется для обозначения всего семейства растений. Растительные белки HAK / KUP / KT содержат 10-15 трансмембранных (TM) сегментов с N- и C-концами на внутриклеточной стороне мембраны, причем последние намного длиннее (Rubio et al., 2000; Gomez-Porras et al. ., 2012). Было широко показано, что они опосредуют потоки K + , когда экспрессируются в бактериях или дрожжах с дефицитом поглощения K + . Более того, растительные белки HAK / KUP / KT различаются по сродству к K + и могут опосредовать приток катионов, а также отток (Fu and Luan, 1998; Rubio et al., 2000; Senn et al., 2001; Bañuelos et al., др., 2002; Гарсиадеблас и др., 2002; Ан и др., 2004). Различные исследования показали, что переносчики HAK / KUP / KT плохо различают K + , Rb + и Cs + и ингибируются NH 4 + (Santa-María et al., 1997; Рубио и др., 2000; Бануэлос и др., 2002; Мартинес-Кордеро и др., 2004). Растительные белки HAK / KUP / KT демонстрируют большое разнообразие с точки зрения субклеточной локализации (плазматическая мембрана, тонопласт или другие эндомембраны; Bañuelos et al., 2002; Jaquinod et al., 2007; Qi et al., 2008; Osakabe et al. ., 2013; Rigas et al., 2013) и паттерны экспрессии (корневые меристемы, сосудистые ткани, замыкающие клетки, плоды или специализированные органы, такие как мухоловки; Elumalai et al., 2002; Ahn et al., 2004; Vicente-Agullo и другие., 2004; Davies et al., 2006; Osakabe et al., 2013; Scherzer et al., 2015).

        Что касается их функций, то некоторые представители семейства HAK / KUP / KT растений способствуют поглощению корнями K + , особенно при низких внешних концентрациях (диапазон высокого сродства) посредством активного транспорта K + (Nieves-Cordones et al. , 2014). Ожидается, что такие высокоаффинные транспортеры K + будут симпортерами H + / K + (Rodriguez-Navarro et al., 1986; Maathuis and Sanders, 1994), но экспериментальное подтверждение этого предположения все еще необходимо.Несколько исследований, проведенных на Arabidopsis , показали, что другие члены участвуют в регуляции размера клеток, распределения ауксина или адаптации к осмотическому стрессу (Very et al., 2014). Эти три роли подчеркивают большое значение и разнообразие ролей транспортеров HAK / KUP / KT в физиологии растений, помимо приобретения K + .

        За последние два десятилетия исследование Arabidopsis заметно ускорило получение информации о молекулярных и физиологических механизмах транспорта K + и белков HAK / KUP / KT.Это стало возможным в основном из-за доступности его геномной последовательности и использования линий вставки Т-ДНК для нокаута функции гена. В последние годы стали доступны последовательности генома многих видов растений. Это, вместе с разработкой методов редактирования генома, таких как эффекторные нуклеазы, подобные активатору транскрипции (TALEN) или кластерная система с регулярными интервалами коротких палиндромных повторов-Cas (CRISPR-Cas), открывает двери для исследования функции генов HAK / KUP / KT. в посевах намного быстрее (Andersen et al., 2015). Это правда, что при исследовании видов сельскохозяйственных культур может быть полезна информация, полученная в Arabidopsis , но изучение определенных физиологических процессов, таких как развитие мясистых плодов, должно проводиться на соответствующих видах. Чтобы ориентировать дальнейшие исследования функции HAK / KUP / KT у видов сельскохозяйственных культур, мы представляем многовидовой филогенетический анализ белков HAK / KUP / KT растений (включающий 913 членов из 46 секвенированных геномов), свидетельствующий о наличии пяти основных клад и замечательные особенности в зависимости от рассматриваемой группы покрытосеменных.

        HAK / KUP / KT Филогения покрытосеменных растений

        Филогенетические взаимоотношения в семействе HAK / KUP / KT последовательно демонстрируют существование нескольких клад у покрытосеменных видов, но со слабой биологической поддержкой такого распределения (Rubio et al., 2000; Gupta et al., 2008; Gomez-Porras et al. al., 2012; Very et al., 2014). Поскольку количество секвенированных геномов покрытосеменных и, следовательно, доступных последовательностей HAK / KUP / KT, заметно увеличилось за последние годы, мы хотели оценить устойчивость и видовое распределение различных клад.С этой целью мы провели инвентаризацию белковых последовательностей HAK / KUP / KT из 43 геномов покрытосеменных плюс трех видов внешних групп (один голосеменный, Picea abies и два примитивных несемянных растения Selaginella moellendorffii и Physcomitrella patens ; Дополнительная таблица S1). Филогенетическое дерево, полученное методом максимальной вероятности для таких последовательностей, выявило пять основных клад (от I до V), где от I до IV следовали предыдущей нумерации (Rubio et al., 2000; Gupta et al., 2008; Gomez-Porras et al., 2012; Very et al., 2014) (рисунок 1). Репрезентативные транспортеры HAK / KUP / KT, которые были функционально охарактеризованы, обнаруживаются по всему дереву. Несколько подгрупп были идентифицированы в кладе I (Ia и Ib) и в кладе II (IIa, IIb и IIc). Затем мы оценили распределение последовательностей HAK / KUP / KT у различных проанализированных видов и отряды покрытосеменных, к которым они принадлежат (Таблица 1). Результаты исследования общего предка двудольных и однодольных видов, Amborella trichopoda , свидетельствуют о наличии переносчиков HAK / KUP / KT у этого предка во всех вышеупомянутых кладах.Они также предположили, что разделение клады I на Ia и Ib произошло в начале линии покрытосеменных, поскольку A. trichopoda имеет транспортеры Ia и Ib, а последовательности внешней группы, принадлежащие кладе I, не были помещены ни в одну из этих двух основных субкладов. Следует отметить, что клада Ib содержала последовательности только от двудольных видов, но не от однодольных (рис. 1, табл. 1). Этот результат предполагает, что клада Ib исчезла в линии однодольных, потому что, как указывалось ранее, она уже присутствовала в A.trichopoda геном. Внутри переносчиков HAK / KUP / KT из геномов двудольных было выявлено различное распределение переносчиков среди отрядов, и в некоторых случаях группы родственных видов имели пустые клады, что свидетельствует о важных событиях в эволюции переносчиков HAK / KUP / KT в отрядах двудольных. . В самом деле, у Solanales переносчики клады IIb не были идентифицированы, тогда как у Cucurbitales это имело место для клады IV. Анализ переносчиков HAK / KUP / KT из видов Brassicales дал поразительные результаты: клады Ib и IV отсутствовали в переносчиках HAK / KUP / KT из семейства Brassicaceae (восемь геномов, включая Arabidopsis thaliana ), тогда как в Carica papaya ( принадлежащий к Brassicales, но не к такому семейству) имел один транспортер, принадлежащий к кладе Ib, и три — к кладе IV.Таким образом, потеря обеих клад могла произойти в процессе эволюции Brassicaceae. На уровне внешней группы переносчики HAK / KUP / KT из Physcomitrella patens были обнаружены в кладах I, IV и V, тогда как 13 последовательностей этого организма распадались на две отдельные ветви, независимые от пяти основных клад. Что касается Selaginella moellendorffii и Picea abies , мы не наблюдали последовательности в кладах IIa и IIb в первом и в кладе III во втором.

        РИСУНОК 1. Филогенетическое дерево семейства HAK / KUP / KT в растениях, содержащее 913 последовательностей из 46 полностью секвенированных геномов покрытосеменных плюс три внешние группы ( Picea abies , Selaginella moellendorffii и Physics патенты ). Белковые последовательности делятся на пять основных клад (от I до V), где V представляет собой новую кладу. Некоторые подклассы клады I содержат только последовательности двудольных (зеленые линии) или однодольных (красная линия) видов.Звездочки обозначают последовательности внешних групп, которые не попали в основные клады. Буквы обозначают подклады внутри клад I и II. Показаны репрезентативные члены в разных классах. Полученные последовательности из общедоступных геномных ресурсов были отнесены к семейству HAK / KUP / KT с помощью Orthomcl (http://orthomcl.org/orthomcl/). Белковая организация оценивалась с помощью веб-сайта MEME suite (http://meme-suite.org/). Затем последовательности были выровнены с помощью MAFFT (http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/), а затем перед построением дерева было применено курирование выравнивания с помощью анализа G-блоков в Seaview.Дерево построено с помощью MEGA6 методом максимального правдоподобия. Масштабная линейка представляет количество замен на сайт. См. Также дополнительную таблицу S1.

        ТАБЛИЦА 1. Распределение гена HAK / KUP / KT среди отрядов и внешних групп покрытосеменных.

        Несмотря на то, что количество транспортеров HAK / KUP / KT, физиологическая роль которых была установлена, относительно невелико, некоторые выводы можно сделать из настоящего анализа. Переносчики, участвующие в высокоаффинном поглощении корнями K + как у двудольных, так и у однодольных видов, попадают в кладу Ia: HvHAK1, AtHAK5, OsHAK1, CaHAK1, SlHAK5 / LeHAK5 и EsHAK5 / ThHAK5, например (Santa-María et al., 1997; Бануэлос и др., 2002; Мартинес-Кордеро и др., 2004; Ньевес-Кордонес и др., 2007; Рубио и др., 2008; Алеман и др., 2009). Однако недавняя работа с рисом OsHAK5 и OsHAK21, который также принадлежит кладе Ia, продемонстрировала более специализированные функции по сравнению с типичным высокоаффинным транспортером K + OsHAK1 (Chen et al., 2015). Например, OsHAK5 и OsHAK21 участвовали в транспорте K + к надземным частям во время дефицита K + или солевого стресса, соответственно (Yang et al., 2014; Шен и др., 2015). Поскольку рис и другие травы, принадлежащие к семейству Poaceae, демонстрируют большее количество последовательностей HAK / KUP / KT клады Ia, чем геномы двудольных (10,29 против 1,84), это можно интерпретировать как специфическую диверсификацию высокоаффинного K + Ia. переносчики у видов Poaceae. Стоит отметить, что нарушение работы гена OsHAK1 привело к резкому снижению урожайности зерна (Chen et al., 2015), тогда как у мутанта AtHAK5 KO (Nieves-Cordones and Rubio, неопубликованные результаты).Было бы интересно узнать, какой вклад в урожай зерна вносят OsHAK1-подобные переносчики из других видов зерновых, поскольку они могут быть хорошими целями для улучшения производства продуктов питания. Что касается транспортеров clade Ib HAK / KUP / KT, то в двух отчетах мы получили некоторую информацию об этой группе. Во-первых, было показано, что VvKUP1 / VvHAK1-a из виноградной лозы экспрессируется в цветках и кожуре виноградных ягод, показывая его самый высокий уровень экспрессии в последней ткани на стадии предварительной проверки (Davies et al., 2006). Во-вторых, DmHAK5 из Dionaea muscipula (Venus flytrap) вносит вклад в высокоаффинный захват K + в переваривающих ловушках (Scherzer et al., 2015). Дальнейшая характеристика транспортеров клады Ib прояснит, специализируются ли они на транспортировке K + в тканях, отличных от корней. Интересно, что недавние сообщения показали, что некоторые транспортеры HAK / KUP / KT клады I, включая DmHAK5 (кладу Ib), SlHAK5, CaHAK1 и AtHAK5 (кладу Ia), активируются комплексами CIPK23-CBL1 / 9, что позволяет по-новому взглянуть на регуляция высокоаффинного транспорта K + (Ragel et al., 2015; Scherzer et al., 2015). Более того, такая регуляторная сеть предлагает новую альтернативу, которую можно использовать для увеличения поглощения K + растениями томата и перца.

        Clade II ассоциирован в Arabidopsis с процессами развития, особенно с теми, которые требуют тургор-управляемой клеточной экспансии. В кладе IIa присутствует AtKUP4 / TRh2 (Tiny Root Hairs 1), который способствует полярной локализации переносчиков ауксина в верхушке корня, что, в свою очередь, устанавливает градиенты ауксина, необходимые как для гравитропных реакций, так и для образования корневых волосков (Rigas et al., 2001, 2013; Vicente-Agullo et al., 2004). Первый клонированный транспортер HAK / KUP / KT из Arabidopsis , AtKUP1 / KT1, принадлежит кладе IIb, но до сих пор ему не приписывали физиологической роли (Quintero and Blatt, 1997; Fu and Luan, 1998; Kim et al. ., 1998). В кладе IIc присутствуют AtKUP2 / 6/8, которые, как было показано, негативно регулируют рост растений и размер клеток, опосредуя поток K + , а не приток (Osakabe et al., 2013). Анализ тройного нулевого мутанта AtKUP2 / 6/8 также показал нарушение ответов ABA в замыкающих клетках и клетках бокового корня.Фосфорилирование AtKUP6 с помощью OST1 связывало адаптацию к осмотическому стрессу с регуляцией потоков K + , опосредованных переносчиками HAK / KUP / KT.

        Что касается других клад, GhKT1 из хлопка (клада III; Gossypium hirsutum ) специфически активируется во время удлинения хлопкового волокна (Ruan et al., 2001). Что касается транспортеров клады IV, то пока охарактеризовано только два. LjKUP из Lotus japonicus был высоко экспрессирован во время позднего развития клубеньков и дополнял бактерии с дефицитом поглощения K + (Desbrosses et al., 2004). С другой стороны, PpHAK13 из внешней группы видов Physcomitrella patens является высокоаффинным переносчиком Na + с низкой проницаемостью K + , который подавлялся в присутствии высоких концентраций Na + (Benito et al. ., 2012). Последний переносчик вызывает вопрос, проницаемы ли другие растительные переносчики HAK / KUP / KT для Na + при низких внешних концентрациях. Наконец, принадлежность к кладе V, PpHAK1 из Physcomitrella patens , как было показано, регулирует устойчивое содержание K + и морфологию растения в условиях, не ограничивающих K + , и способствует высокому сродству Rb + и Cs . Поглощение + во время голодания по K + (Garciadeblas et al., 2007).

        Помимо их физиологической роли, в некоторых случаях оценивалась субклеточная локализация транспортеров HAK / KUP / KT, и было показано, что она весьма разнообразна. Более того, не существует четкой взаимосвязи между филогенетической кладой, к которой принадлежит переносчик, и его клеточной мембраной-мишенью. Например, несколько членов нацелены на плазматическую мембрану, такие как AtHAK5, OsHAK1, OsHAK21, OsHAK5 (клад I; Qi et al., 2008; Yang et al., 2014; Chen et al., 2015; Shen et al. , 2015), AtKUP6 (клад IIc; Osakabe et al., 2013) и LjKUP (clade IV; Desbrosses et al., 2004), тогда как другие нацелены на тонопласт (OsHAK10, clade IIc и AtKUP5 clade V; Jaquinod et al., 2007; Bañuelos et al., 2002) или эндоплазматические ретикулумоподобные эндомембраны (AtKUP4 / TRh2; Rigas et al., 2013).

        Заключение и перспективы

        Растение Транспортеры HAK / KUP / KT K + , как было показано, играют ключевую роль в физиологии растений, такие как приобретение K + , адаптация к абиотическому стрессу и процессы развития.Интересно, что тот факт, что переносчики HAK / KUP / KT проницаемы для K + , объясняет только часть фенотипов, проявляемых растениями, у которых они отсутствуют, как в случае AtHAK5 или AtKUP4 / TRh2, где активизация AtHAK5-опосредованного K Поглощение + или взаимосвязь между распределением ауксина и активностью AtKUP4 / TRh2 заслуживают дальнейшего внимания. Из нашего анализа можно сделать вывод, что вклад переносчиков HAK / KUP / KT K + в физиологию растений может существенно различаться у разных видов, особенно когда целые клады отсутствуют в данной группе видов, как показано.Следовательно, Arabidopsis все еще может быть хорошей моделью для определенных хорошо сохраняющихся ролей переносчиков HAK / KUP / KT K + , например AtHAK5, но необходимы исследования других видов, особенно сельскохозяйственных культур: (i) для изучения переносчиков принадлежащих к кладам Ib или IV (отсутствуют в семействе Brassicaceae) или кладам, где произошла значительная дупликация генов (клада Ia у однодольных) и (ii) для исследования физиологических аспектов, которые отсутствуют у Arabidopsis (например, развитие мясистых плодов).Кроме того, некоторые белки HAK / KUP / KT уже могут рассматриваться как интересные кандидаты для будущих стратегий улучшения сельскохозяйственных культур, например, GhKT1 (особенно активируется во время удлинения хлопкового волокна), VvKUP1 / VvHAK1-a (высоко экспрессируется на стадии предварительного тестирования) и OsHAK1 ( критически важны для урожая зерна риса). В соответствии с этим утверждением, плод персика является органом, в котором у этого вида экспрессируется больше генов HAK / KUP / KT (Song et al., 2015). Дальнейшие исследования этого семейства транспортеров будут способствовать пониманию того, как мы можем проектировать установки для производства продуктов питания и возобновляемой биомассы.

        Авторские взносы

        MN-C, RR и FR выполнили экспериментальный анализ. MN-C написал статью при участии AC, RMR, VM, IG и FR.

        Финансирование

        Эта работа финансировалась грантом AGL2012-33504 от Ministerio de Economia y Competitividad, Испания. RR является получателем профилактического контракта FPU от Ministerio de Educación, Cultura y Deporte, Испания.

        Заявление о конфликте интересов

        Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

        Дополнительные материалы

        Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/article/10.3389/fpls.2016.00127

        ТАБЛИЦА S1 | Список последовательностей HAK / KUP / KT, используемых на рисунке 1 (файл Excel) .

        Список литературы

        Ахмад И., Маатуис Ф. Дж. (2014). Распределение калия в клетках и тканях: физиологическое значение, механизмы и регуляция. J. Plant Physiol. 171, 708–714.DOI: 10.1016 / j.jplph.2013.10.016

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ан, С. Дж., Шин, Р., Шахтман, Д. П. (2004). Экспрессия генов KT / KUP в Arabidopsis и роль корневых волосков в захвате K + . Plant Physiol. 134, 1135–1145. DOI: 10.1104 / стр.103.034660

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Алеман Ф., Ньевес-Кордонес М., Мартинес В. и Рубио Ф. (2009).Дифференциальная регуляция генов HAK5, кодирующих высокоаффинные транспортеры K + из Thellungiella halophila и Arabidopsis thaliana . Environ. Exp. Бот. 65, 263–269. DOI: 10.1016 / j.envexpbot.2008.09.011

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Андерсен, М. М., Ландес, X., Сян, В., Анищенко, А., Фалхоф, Дж., Эстерберг, Дж. Т. и др. (2015). Возможность новых селекционных технологий для органического земледелия. Trends Plant Sci. 20, 426–434. DOI: 10.1016 / j.tplants.2015.04.011

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Бануэлос М. А., Гарсиадеблас Б., Куберо Б. и Родригес-Наварро А. (2002). Инвентаризация и функциональная характеристика транспортеров калия HAK риса. Plant Physiol. 130, 784–795. DOI: 10.1104 / pp.007781

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Бануэлос, М.А., Кляйн, Р.Д., Александер-Боуман, С.Дж., И Родригес-Наварро, А. (1995). Переносчик калия дрожжей Schwanniomyces occidentalis , гомологичных системе Купа Escherichia coli , обладает высокой концентрационной способностью. EMBO J. 14, 3021–3027.

        PubMed Аннотация | Google Scholar

        Бенито Б., Гарсиадеблас Б. и Родригес-Наварро А. (2012). Транспортеры HAK из Physcomitrella patens и Yarrowia lipolytica опосредуют поглощение натрия. Physiol растительных клеток. 53, 1117–1123. DOI: 10,1093 / pcp / pcs056

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Chen, G., Hu, Q., Luo, L., Yang, T., Zhang, S., Hu, Y., et al. (2015). Переносчик калия из риса OsHAK1 необходим для поддержания роста, опосредованного калием, и функции толерантности к соли в диапазонах низких и высоких концентраций калия. Среда растительных клеток. 38, 2747–2765. DOI: 10.1111 / pce.12585

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Дэвис, К., Шин Р., Лю В., Томас М. Р. и Шахтман Д. П. (2006). Транспортеры, экспрессируемые во время развития ягод винограда ( Vitis vinifera L.), связаны с увеличением размера ягод и накоплением калия в ягодах. J. Exp. Бот. 57, 3209–3216. DOI: 10.1093 / jxb / erl091

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Дебросс, Г., Копка, К., Отт, Т., и Удварди, М. К. (2004). Lotus japonicus LjKUP индуцируется поздно во время развития узелка и кодирует транспортер калия плазматической мембраны. Мол. Взаимодействие с растительными микробами. 17, 789–797. DOI: 10.1094 / MPMI.2004.17.7.789

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Элумалай Р. П., Нагпал П. и Рид Дж. У. (2002). Мутация в гене транспортера калия Arabidopsis KT2 / KUP2 влияет на рост клеток побегов. Растительная клетка 14, 119–131. DOI: 10.1105 / tpc.010322

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Эванс, Х. Дж., И Соргер, Г.Дж. (1966). Роль минеральных элементов с акцентом на одновалентные катионы. Annu. Rev. Plant Physiol. 17, 47–76. DOI: 10.1146 / annurev.pp.17.060166.000403

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Фу, Х. Х., и Луан, С. (1998). AtKUP1: транспортер с двойным сродством K + из Arabidopsis . Растительная клетка 10, 63–73. DOI: 10.2307 / 3870629

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Гарсиадеблас, Б., Барреро-Хиль, Дж., Бенито, Б., и Родригес-Наварро, А. (2007). Системы транспорта калия в мхе Physcomitrella patens : растения pphak1 раскрывают сложность поглощения калия. Plant J. 52, 1080–1093. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2007.03297.x

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Гарсиадеблас Б., Бенито Б. и Родригес-Наварро А. (2002). Молекулярное клонирование и функциональная экспрессия в бактериях транспортеров калия CnHAK1 и CnHAK2 морских водорослей Cymodocea nodosa . Plant Mol. Биол. 50, 623–633. DOI: 10.1023 / A: 1019951023362

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Gomez-Porras, J. L., Riaño-Pachón, D. M., Benito, B., Haro, R., Sklodowski, K., Rodríguez-Navarro, A., et al. (2012). Филогенетический анализ переносчиков K + у мохообразных, ликофитов и цветковых растений указывает на специализацию сосудистых растений. Фронт. Plant Sci. 3: 167. DOI: 10.3389 / fpls.2012.00167

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Гупта, М., Qiu, X., Wang, L., Xie, W., Zhang, C., Xiong, L., et al. (2008). Семейство генов транспортеров калия KT / HAK / KUP и профиль их экспрессии в течение всего жизненного цикла в рисе ( Oryza sativa ). Мол. Genet. Геномика 280, 437–452. DOI: 10.1007 / s00438-008-0377-7

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Jaquinod, M., Villiers, F., Kieffer-Jaquinod, S., Hugouvieux, V., Bruley, C., Garin, J., et al. (2007). Протеомическое вскрытие вакуолей Arabidopsis thaliana , выделенных из клеточной культуры. Мол. Клетка. Протеомика 6, 394–412. DOI: 10.1074 / mcp.M600250-MCP200

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ким, Э. Дж., Квак, Дж. М., Уозуми, Н., и Шредер, Дж. И. (1998). AtKUP1: ген Arabidopsis , кодирующий высокоаффинную транспортную активность калия. Растительная клетка 10, 51–62. DOI: 10.2307 / 3870628

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ли, Р. А., и Вин Джонс, Р. Г.(1984). Гипотеза, связывающая критические концентрации калия для роста с распределением и функциями этого иона в растительной клетке. New Phytol. 97, 1–13. DOI: 10.1111 / j.1469-8137.1984.tb04103.x

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Маатуис, Ф. Дж. М., и Сандерс, Д. (1994). Механизм высокоаффинного захвата калия корнями Arabidopsis thaliana . Proc. Natl. Акад. Sci. США 91, 9272–9276. DOI: 10.1073 / pnas.91.20.9272

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Маршнер П. (2012). Минеральное питание высших растений Маршнера , 3-е изд. Лондон: Academic Press.

        Google Scholar

        Мартинес-Кордеро, М.А., Мартинес, В., и Рубио, Ф. (2004). Клонирование и функциональная характеристика высокоаффинного транспортера K + HAK1 перца. Plant Mol. Биол. 56, 413–421. DOI: 10.1007 / s11103-004-3845-4

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Mäser, P., Thomine, S., Schroeder, J. I., Ward, J. M., Hirschi, K., Sze, H., et al. (2001). Филогенетические отношения внутри семейств переносчиков катионов Arabidopsis . Plant Physiol. 126, 1646–1667. DOI: 10.1104 / стр.126.4.1646

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ньевес-Кордонес, М., Алеман, Ф., Мартинес, В., и Рубио, Ф. (2014). Поглощение K + корнями растений. Участвующие системы, их регуляция и параллели у других организмов. J. Plant Physiol. 171, 688–695. DOI: 10.1016 / j.jplph.2013.09.021

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ньевес-Кордонес, М., Мартинес-Кордеро, М.А., Мартинес, В., и Рубио, Ф. (2007). Чувствительный к Nh5 + компонент доминирует над высокоаффинным захватом K + в растениях томата. Plant Sci. 172, 273–280. DOI: 10.1016 / j.plantsci.2006.09.003

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Осакабэ Ю., Аринага Н., Умедзава, Т., Кацура, С., Нагамачи, К., Танака, Х., и др. (2013). Осмотические реакции на стресс и рост растений контролируются переносчиками калия в Arabidopsis . Растительная клетка 25, 609–624. DOI: 10.1105 / tpc.112.105700

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ци, З., Хэмптон, К. Р., Шин, Р., Баркла, Б. Дж., Уайт, П. Дж., И Шахтман, Д. П. (2008). Высокоаффинный транспортер K + AtHAK5 играет физиологическую роль в planta при очень низких концентрациях K + и обеспечивает путь поглощения цезия в Arabidopsis . J. Exp. Бот. 59, 595–607. DOI: 10.1093 / jxb / erm330

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Кинтеро, Ф. Дж., И Блатт, М. Р. (1997). Новое семейство транспортеров K + из Arabidopsis , которые сохраняются во всех типах. FEBS Lett. 415, 206–211. DOI: 10.1016 / S0014-5793 (97) 01125-3

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Рагель, П., Роденас, Р., Гарсия-Мартин, Э., Андрес, З., Вильялта, И., Nieves-Cordones, M., et al. (2015). CIPK23 регулирует HAK5-опосредованный высокоаффинный захват K + в корнях Arabidopsis . Plant Physiol. 169, 2863–2873. DOI: 10.1104 / стр.15.01401

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Rigas, S., Debrosses, G., Haralampidis, K., Vicente-Agullo, F., Feldmann, K.A., Grabov, A., et al. (2001). TRh2 кодирует переносчик калия, необходимый для роста кончиков корневых волосков Arabidopsis . Растительная клетка 13, 139–151. DOI: 10.1105 / tpc.13.1.139

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Rigas, S., Ditengou, F. A., Ljung, K., Daras, G., Tietz, O., Palme, K., et al. (2013). Корневой гравитропизм и развитие корневых волосков представляют собой связанные реакции развития, регулируемые гомеостазом ауксина в верхушке корня Arabidopsis . New Phytol. 197, 1130–1141. DOI: 10.1111 / nph.12092

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Родригес-Наварро, А., Блатт, М. Р., Слейман, К. Л. (1986). Симпорт калий-протонов в Neurospora crassa . J. Gen. Physiol. 87, 649–674. DOI: 10.1085 / jgp.87.5.649

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Руан, Ю. Л., Ллевеллин, Д. Дж., И Фербанк, Р. Т. (2001). Контроль удлинения одноклеточного хлопкового волокна за счет обратимого в процессе развития гейтирования плазмодесм и скоординированной экспрессии сахарозы и транспортеров K + и экспансина. Растительная клетка 13, 47–60.DOI: 10.1105 / tpc.13.1.47

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Рубио, Ф., Ньевес-Кордонес, М., Алеман, Ф., и Мартинес, В. (2008). Относительный вклад AtHAK5 и AtAKT1 в захват K + в диапазоне концентраций с высоким сродством. Physiol. Растение. 134, 598–608. DOI: 10.1111 / j.1399-3054.2008.01168.x

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Рубио, Ф., Санта-Мария, Г. Э., и Родригес-Наварро, А. (2000).Клонирование кДНК Arabidopsis и ячменя, кодирующих переносчики калия HAK в клетках корня и побегов. Physiol. Растение. 109, 34–43. DOI: 10.1034 / j.1399-3054.2000.100106.x

        CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Санта-Мария, Г. Э., Рубио, Ф., Дубковски, Дж., И Родригес-Наварро, А. (1997). Ген HAK1 ячменя является членом большого семейства генов и кодирует высокоаффинный переносчик калия. Растительная клетка 9, 2281–2289. DOI: 10.2307 / 3870585

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Шерцер, С., Бём, Дж., Крол, Э., Шабала, Л., Кройцер, И., Лариш, К. и др. (2015). Сенсорная киназа кальция активирует системы захвата калия в железистых клетках венеринских мухоловок. Proc. Natl. Акад. Sci. США 112, 7309–7314. DOI: 10.1073 / pnas.1507810112

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Шлейер М. и Баккер Э. П. (1993). Исследования нуклеотидной последовательности и делеции 3’-конца показывают, что K (+) — захватывающий белок kup из Escherichia coli состоит из гидрофобного ядра, связанного с большим и частично существенным гидрофильным С-концом. J. Bacteriol. 175, 6925–6931.

        Google Scholar

        Сенн М. Э., Рубио Ф., Бануэлос М. А. и Родригес-Наварро А. (2001). Сравнительные функциональные особенности переносчиков растительного калия HvHAK1 и HvHAK2. J. Biol. Chem. 276, 44563–44569. DOI: 10.1074 / jbc.M108129200

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Шен, Ю., Шен, Л., Шен, З., Цзин, В., Ге, Х., Чжао, Дж. И др. (2015). Переносчик калия OsHAK21 поддерживает ионный гомеостаз и устойчивость к солевому стрессу у риса. Среда растительных клеток. 38, 2766–2779. DOI: 10.1111 / pce.12586

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Сонг, З. З., Ма, Р. Дж., И Ю, М. Л. (2015). Полногеномный анализ и идентификация семейства генов-транспортеров калия KT / HAK / KUP у персика ( Prunus persica ). Genet. Мол. Res. 14, 774–787. DOI: 10.4238 / 2015. 30.21 января

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Вери, А.А., Ньевес-Кордонес, М., Дейли, М., Хан, И., Физамес, К., и Сентенак, Х. (2014). Молекулярная биология транспорта K + через мембрану растительной клетки: что мы узнаем из сравнения видов растений? J. Plant Physiol. 171, 748–769. DOI: 10.1016 / j.jplph.2014.01.011

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Vicente-Agullo, F., Rigas, S., Desbrosses, G., Dolan, L., Hatzopoulos, P., and Grabov, A. (2004). Переносчик калия TRh2 необходим для транспорта ауксина в корнях Arabidopsis . Plant J. 40, 523–535. DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2004.02230.x

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Вигода, Н., Мошелион, М., Моран, Н. (2014). Является ли оболочка пучка листьев «умным клапаном потока» для питания K + ? J. Plant Physiol. 171, 715–722. DOI: 10.1016 / j.jplph.2013.12.017

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Ян, Т., Чжан, С., Ху, Ю., Ву, Ф., Ху, К., Чен, Г., и другие. (2014). Роль переносчика калия OsHAK5 в приобретении и переносе калия от корней к побегам риса при низких уровнях поступления калия. Plant Physiol. 166, 945–959. DOI: 10.1104 / стр.114.246520

        PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

        Канадская пекарня — «предпочтительный покупатель» для Vermont Bread, Koffee Kup | Местные новости

        BRATTLEBORO — Пекарня Koffee Kup и ее активы вскоре могут оказаться в руках мужа и жены из Нью-Брансуика, которые владеют крупнейшей семейной коммерческой пекарней в Атлантической Канаде.

        В четверг утром члены Совета экономического прогресса штата Вермонт проголосовали за одобрение заявки на получение программы поощрения роста занятости штата Вермонт, поданной пекарней миссис Данстер со штаб-квартирой в Сассексе, Нью-Брансуик.

        Компания VEPC одобрила заявку на получение льгот на сумму до 580 068 долларов для пекарни Burlington и до 1,22 миллиона долларов для предприятия в Браттлборо.

        К полудню четверга сделка, казалось, была заключена.

        «Мы очень рады объявить сегодня о создании новой компании под названием North Atlantic Baking Company», — написал Блэр Хислоп, совладелец компании Mrs.Данстер со своей женой Розалин в пресс-релизе, объявляющем о продаже. «Нам сообщили, что North Atlantic Baking Company является предпочтительным покупателем активов Koffee Kup, и мы сосредоточены на быстром завершении переговоров, которые приведут к возобновлению производства в ближайшее время».

        Hyslop’s приобретет Koffee Kup в Берлингтоне, Vermont Bread Company в Браттлборо и Superior Bakery в Норт-Гросвенор-Дейл, штат Коннектикут.

        «Наш план состоит в том, чтобы управлять двумя Vermont Bakeries и вступать в переговоры с третьими сторонами с целью продать Superior Bakery в Коннектикуте », — написал Блэр Хислоп.

        «Мы очень рады приветствовать Блэра и Розели Хислоп из North Atlantic Baking Company в Вермонте», — сказал Адам Гринольд, исполнительный директор Brattleboro Development Credit Corporation. «Они привносят богатый деловой опыт и высоко ценимую бизнес-культуру в два культовых бренда Вермонта — Koffee Kup Bakery и Vermont Bread».

        Гринольд сказал, что будет рад увидеть, как бывшие сотрудники Vermont Bread вернутся в новую собственность.

        В пресс-релизе говорится, что North Atlantic Baking Company «продолжит продавать те же хлебобулочные изделия, которые сделали компанию известной по всей Новой Англии, под брендами Koffee Kup и Vermont Bread Company.«

        Новая компания ведет переговоры о лизинговом соглашении с получателем, чтобы облегчить быстрое возвращение к выпечке в пекарнях Берлингтона и Брэттлборо», — написал он.

        «Мы надеемся завершить это в течение нескольких дней», — написал Хислоп. «Соглашение об аренде позволит нам быстро вернуть сотрудников к работе и вернуть продукты на полки, пока мы работаем через формальную передачу активов, детали которой в значительной степени согласованы».

        Компания Hyslops продолжит управлять миссис.Данстера, одновременно став совладельцами и со-исполнительными директорами North Atlantic Baking Company.

        «Мы очень рады, что компания снова стала семейной», — заявила Розалин Хислоп в пресс-релизе. «Мы уже доставляем нашу свежую выпечку в каждый магазин в Нью-Брансуике, Новой Шотландии, на острове Принца Эдуарда и в штате Мэн несколько раз в неделю с компанией Mrs. Англия. Мы готовы посвятить этот проект нашему опыту, энтузиазму и ресурсам и рады работать с этими талантливыми и опытными сотрудниками в позитивном, ориентированном на семью рабочем пространстве.«

        » «Мы надеемся на сотрудничество с командой трудолюбивых сотрудников и дистрибьюторов, которые ежедневно производят и поставляют на рынок восхитительный ассортимент выпечки», — написал Блэр Хислоп. «Мы намерены продолжить их традицию поставки высококачественного хлеба, булочек, английских маффинов и пончиков нашим постоянным клиентам, в то же время помогая компании полностью раскрыть свой потенциал».

        Миссис Данстер была вторым заинтересованным покупателем, получившим разрешение на подачу заявки на участие в программе VEGI.

        6 мая VEPC одобрил заявку от East Baking Company, базирующейся в Холиоке, штат Массачусетс, о поощрении до 1,2 миллиона долларов. Правление VEPC также одобрило заявку VEGI на поощрение предприятия в Берлингтоне почти на 1,2 миллиона долларов.

        «Мы, конечно, были очень заинтересованы в приобретении пекарни Koffee Kup и ее активов», — написал Джефф МакКэрролл, вице-президент East Baking Company, в электронном письме Реформатору. «Мы рады, что сотрудники вернулись к работе, и грустим за тех, кто не вернется.

        МакКэрролл написал, что East Baking Company была разочарована тем, что государство предложило стимулы для канадской компании, но Меган Салливан, исполнительный директор VEPC, сказала, что стимулы основаны на производительности, а это означает, что покупатель не будет получать поощрительные доллары, пока не найдет работу. целевые показатели роста и заработной платы в Вермонте и продолжают поддерживать их в ближайшие годы.

        «Несмотря на то, что мы не всегда можем предотвратить закрытие компании, VEPC стремится усердно использовать эту программу для стимулирования роста рабочих мест и поощрения компаний к перемещению или расширению своей деятельности в штате, что иначе бы не произошло, — сказал Салливан.

        1 апреля пекарня Koffee Kup Bakery, купившая Vermont Bread в 2013 году, была приобретена American Industrial Acquisition Corporation. Но только 25 дней спустя сотрудники офисов в Браттлборо, Берлингтоне и Норт-Гросвенор-Дейл, штат Коннектикут, прибыли на свои обычные утренние смены по понедельникам только для того, чтобы им сказали идти домой, поскольку у них больше нет работы.

        BRATTLEBORO — Более 90 сотрудников Vermont Bread Company на Cotton Mill Hill остались без…

        По словам Джеффа Сэндса, специалиста Dorset Partners и старшего советника в Северной Америке American Industrial Acquisition Corporation в Северной Америке, закрытие было обвинено в неспособности найти инвесторов для погашения долгов, накопленных Koffee Kup за последние четыре года.

        «Виной всему четыре года убытков, — сказал Сэндс. «Всем нужна сюжетная линия злодея, но ее просто нет. Этого просто невозможно было спасти «.

        Закрытие было настолько внезапным, что сотрудники подали коллективный иск в федеральный суд, утверждая, что AIAC нарушил федеральный Закон 1988 года об уведомлении о корректировке и переподготовке рабочих.

        БЕРЛИНГТОН — Бывший сотрудник является первым истцом в коллективном иске против Вермонта…

        Сотрудникам нанесен еще один удар, когда окончательная зарплата была переведена непосредственно на текущие счета, а затем отозвана обратно после спора о том, кто несет ответственность за выплаченную компенсацию за выходной.Дело дошло до Верховного суда Читтендена.

        БЕРЛИНГТОН — Koffee Kup подал ходатайство о чрезвычайной ситуации в Верховный суд Читтендена, as…

        В 2014 году компания Hyslops приобрела Mrs.Пекарня Dunster’s Bakery, основанная Ингрид Данстер в 1960-х годах как компания Mrs. Dunster’s Donut Company.

        По словам Хаддла, с момента покупки миссис Данстер компания Hyslops расширилась за счет покупки розничных магазинов McBuns в Монктоне, рынка Kredl’s Corner Market в Хэмптоне и пекарни Snairs на острове Принца Эдуарда и в Новой Шотландии. В прошлом году миссис Данстер открыла новую пекарню площадью 37000 квадратных футов в Монктоне, городе в Нью-Брансуике, чтобы производить свежеиспеченный хлеб, булочки, выпечку и ракушки для пиццы для продуктовых магазинов и ресторанов в Приморье и Мэне, а также замороженная выпечка для магазинов по всей стране, согласно статье, опубликованной Huddle в ноябре прошлого года.

        Миссис Данстер ежегодно росла на 30-40 процентов в течение последних пяти лет, сказал Хаддл Блэр Хислоп.

        «За последний год перед Covid мы выросли на 50 процентов, за этот год, так что это был замечательный, замечательный подъем», — сказал он. «В какой-то момент за шестьдесят дней мы добавили 100 сотрудников».

        Половина этого роста пришлась на основной бизнес, а другая половина — на многочисленные приобретения, которые компания совершала с 2015 года в районе Приморья.

        Koffee Kup Bakery закрывается, увольняет более 200 рабочих

        BURLINGTON, Vt. (WCAX) — В понедельник пекарня Koffee Kup в Вермонте прекратила работу на своих заводах в Берлингтоне и Беннингтоне после того, как компания заявила, что не смогла выкопать свой выход из монтажа финансовые проблемы.

        Пекарни Koffee Kup неожиданно закрылись в понедельник, уволив примерно 247 сотрудников.

        Рабочие прибыли на смену в Берлингтон в понедельник вечером и обнаружили сообщение, уведомляющее их о закрытии.

        «Вам нужно опустошить свои вещи, забрать свои личные вещи и больше не приходить на работу», — сказал Поль Крепо, который проработал водителем-курьером в течение двух лет.

        «Так мы зарабатываем на жизнь. Ты скажешь нам … Мы сидели и ждали, чтобы заполнить завтрашнюю доставку, и ты собираешься сказать нам, что у тебя нет работы, мы не знаем, что тебе сказать, — сказал Стивен Кокс. который также проработал два года водителем-курьером.

        Компания во вторник выступила с заявлением, в котором говорится, что закрытие было вызвано растущими финансовыми проблемами: «Каждый из последних четырех лет Koffee Kup нес существенные финансовые убытки и не мог найти выхода из своих проблем. Сотрудники, кредиторы, поставщики и клиенты сделали все возможное, чтобы поддержать Koffee Kup в то время. За последние 6 месяцев компания не смогла найти нового инвестора / оператора, который был бы готов выделить ресурсы, необходимые для восстановления здоровья компании.”

        Некоторые считают Koffee Kup заведением штата Вермонт, предлагающим широкий выбор хлеба и пончиков в продуктовых магазинах, ресторанах и магазинах.

        Мон Мангар, ночной пекарь, явился в понедельник вечером на Берлингтон-Риверсайд-авеню, чтобы начать свою смену, и был потрясен, что никого там не обнаружил.

        «Я думаю, что сегодня это была работа, поэтому я прихожу на работу. Но я никого не вижу внутри, я сбит с толку и думаю: «Что сегодня не так?» — сказал Мангар.

        Кокс и Крепо сказали, что обнаружение того, как они это сделали, было пощечиной, и они понятия не имели, что что-то пошло не так в дни, предшествовавшие закрытию.

        «Это была хорошая работа, и все мы в нашем депо, мы все прекрасно ладили и помогали друг другу, когда всем нам нужна была помощь и тому подобное. Это было довольно приличное место для работы », — сказали они.

        Koffee Kup существует с 1940 года и, согласно его веб-сайту, расширил охват товаров через Новую Англию вплоть до Вашингтона, округ Колумбия.C.

        Департамент труда штата Вермонт заявляет, что будет связываться с работодателем и оказывать содействие сотрудникам, чтобы они предлагали поддержку в связи с потерей работы.

        Авторские права 2021 WCAX. Все права защищены.

        Приток K + Kup в Escherichia coli сопровождается уменьшением оттока H + | Письма о микробиологии FEMS

        Абстрактные

        Escherichia coli накапливает K + посредством множественных систем поглощения, из которых Kup является основной транспортной системой при кислом pH.В клетках, выращенных в ферментативных условиях при pH 5,5, приток K + штаммом дикого типа при гиперосмотическом стрессе при pH 5,5 сопровождался заметным снижением оттока H + при соотношении K 1: 1. + до H + флюсы. Это наблюдалось с клетками, обработанными N, N ‘-дициклогексилкарбодиимидом. Сходные результаты с мутантом, дефектным по Kdp и TrkA, но с функциональной системой Kup, но не с мутантом, дефектным по Kdp и Kup, но имеющим активную систему TrkA, предполагают, что Kup действует как H + –K + -симпортер.

        1 Введение

        Escherichia coli накапливает K + посредством множественных систем поглощения, из которых TrkA и Kup (ранее TrkD) являются конститутивными системами с низким сродством (обзоры см. [1,2]). Многокомпонентная система с высокой скоростью поглощения K + , TrkA, по-видимому, наиболее заметна в ответе клеток на гиперосмотический стресс и в других условиях. Однокомпонентная система с низкой скоростью поглощения K + , Kup, становится важной при низком pH, когда активность TrkA недостаточна, и когда Kdp, известный как высокоаффинная система поглощения K + , не индуцируется. [3].Белок Kup может состоять из двух доменов, первый из которых, по-видимому, образует интегральный мембранный белок, который может пересекать мембрану 12 раз, а С-концевая часть, как предполагается, образует гидрофильный домен, расположенный на цитоплазматической стороне мембраны. [4]. Важно отметить, что в аминокислотной последовательности, транслируемой с гена, нет никаких признаков АТФ-связывающего мотива [4]. Эта система, использующая только Δ μ H + [3,5], кажется, работает как вторичный портер.

        Результаты настоящего исследования показывают связь между потоками H + и K + в E.coli , выращенные при pH 5,5, и предполагают, что Kup действует как H + –K + -симпортер.

        2 Материалы и методы

        2.1 Штаммы и рост бактерий, подготовка клеток и мембранных везикул, химические вещества

        E. coli штамм дикого типа FRAG5 и мутанты, дефектные по различным системам захвата K + , TK1001 (Δ kdpABC5 trkD1 ) [6] и TK1110 (Δ kdpABC5 trkA405 ) [7].Эти штаммы, происходящие от E. coli K12, также были F λ . FRAG5 был от W. Epstein (Чикагский университет, Чикаго, Иллинойс, США), а TK1001 и TK1110 были предоставлены H. Kobayashi (Университет Чиба, Чиба, Япония).

        Рост бактерий при 37 ° C на 2 г / л -1 глюкозы в анаэробных ферментативных условиях при начальном pH 5,5 был описан ранее [3,8]. Клетки, дважды промытые 10 мМ трис-Cl pH 5,5 и обработанные 10 мМ этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА), подвергались гиперосмотическому стрессу путем переноса в аналитическую смесь.Последний состоял из 200 мМ (если не указано иное) трис-фосфата pH 5,5, 0,4 мМ MgSO 4 , 1 мМ NaCl и 1 мМ (если не указано иное) KCl. Впоследствии была добавлена ​​глюкоза. Во время отмывки клетки стали частично истощенными по K + и, следовательно, подходящими для изучения поглощения K + . Для поддержания высокой осмолярности смеси для анализа использовали неметаболизирующийся сахар (сахарозу). Все анализы проводились в закрытых камерах. Концентрацию бактерий в разбавленной суспензии оценивали по мутности (поглощение при 600 нм) и калибровочной кривой, связывающей поглощение с количеством колоний, выращенных на твердой среде.Мембранные везикулы получали методом осмотического лизиса [9].

        Полипептон (Kyokuto, Япония), 9-аминоакридин (AA), N, N ′ -дициклогексилкарбодиимид (DCCD), салициловая кислота, катион тетрафенилфосфония (TPP + ) (бромид) (Sigma, США) и др. реагенты — АЧ.

        2.2 Измерения потоков K

        + и H +

        Транспорт H + и K + измеряли с использованием соответствующих селективных электродов, как описано [10].Небольшие изменения в [H + ] ex и [K + ] ex регистрировали с помощью многоканального потенциометра и калибровали титрованием с HCl и KCl, соответственно. Транспортные измерения и другие анализы проводили при 37 ° C. При использовании бактерии обрабатывали 0,1 мМ DCCD в течение 10 минут перед анализами.

        2.3 Анализ АТФазы

        Активность

        АТФазы оценивали по количеству P , высвобождаемых мембранными везикулами с АТФ, как описано [11].Везикулы, расположенные правой стороной наружу, использовали для анализов АТФазы. Активность АТФазы составляла 60% от активности везикул, обращенных внутрь [12]. Реакцию инициировали добавлением 3 мМ АТФ-Трис (pH 5,5) к аналитической смеси с везикулами и останавливали 5% додецилсульфатом натрия в образцах, взятых через 1, 2, 3 и 4 мин. При использовании везикулы инкубировали с 0,05 мМ DCCD в течение 10 мин перед добавлением АТФ.

        2.4 Определение pH цитоплазмы

        PH цитоплазмы

        ([pH] в ) определяли по тушению флуоресценции АК с использованием описанного метода [13].В смесь для анализа добавляли 0,01 мМ АК, использовали длины волн возбуждения и испускания 339 и 460 нм, измеряя флуоресценцию с помощью спектрофлуориметра. Интенсивность флуоресценции оставалась постоянной и незначительно снижалась при pH ниже 8,5 (рис. 1), а гашение флуоресценции бактериями происходило в присутствии ΔpH, когда внешний pH ([pH] из ) был выше, чем [pH] в (рис.1). Тушение флуоресценции устранялось протонофором, 1 мкМ карбонилцианид m -хлорфенилгидразон (CCCP) был эффективен для блокирования тушения (рис.1). Значение [pH] в также определялось распределением салициловой кислоты (см. Раздел 2.5).

        1

        Зависимость флуоресценции АК и ее гашения от pH, вызванного E. coli FRAG5, выращенной в ферментативных условиях при pH 5,5. В смесь для анализа добавляли 0,01 мМ АК, и бактерии подвергались гиперосмотическому стрессу (см. Раздел 2). Количество бактерий составляло ∼5–8 × 10 9 клеток мл −1 . Интенсивность флуоресценции ( F , ♦) в относительных единицах при pH 5.0 был принят за 100%, тушение флуоресценции ( Q ,?) Выражалось в% от начального значения F . Добавление 1 мкМ CCCP устраняет гашение (). Приведены средние значения и стандартные ошибки повторных измерений.

        1

        Зависимость флуоресценции АК и ее гашение от pH, индуцированного E. coli FRAG5, выращенным в ферментативных условиях при pH 5,5. В смесь для анализа добавляли 0,01 мМ АК, и бактерии подвергались гиперосмотическому стрессу (см. Раздел 2).Количество бактерий составляло ∼5–8 × 10 9 клеток мл −1 . Интенсивность флуоресценции ( F , ♦) в относительных единицах при pH 5,0 принимали за 100%, тушение флуоресценции ( Q ,?) Выражали в% от начального значения F . Добавление 1 мкМ CCCP устраняет гашение (). Приведены средние значения и стандартные ошибки повторных измерений.

        2.5 Определение движущей силы протона

        Движущая сила протона (Δ μ H + / F ) была рассчитана как сумма Δ Ψ и ΔpH согласно Δ μ H + / F = Δ Ψ — — ΔpH, где Z равно RT / F равно 61.1 мВ при 37 ° C. Δ Ψ и ΔpH определяли из распределений TPP + и салициловой кислоты между цитоплазмой и внешней средой, как описано [8,10,14]. В смесь для анализа добавляли 1 мкМ TPP + и 10 мкМ салициловую кислоту, затем вводили бактерии и определяли изменения концентраций этих зондов с использованием соответствующих селективных электродов. Для учета адсорбции зондов на поверхности клеток определяли их связывание после кипячения клеток в течение 5 мин.Использовали внутриклеточный объем 0,53 × 10 -9 мкл / клетку.

        3 Результаты и обсуждение

        3,1 K

        + приток при гиперосмотическом стрессе и протонная движущая сила в E. coli при низком pH

        Trchounian и Kobayashi [3] показали, что Kup является основной системой поглощения K + при pH 5,5 при гиперосмотическом стрессе у E. coli , выращенных в анаэробных или аэробных условиях. Поглощение K + Kup блокировалось протонофором, но не валиномицином, арсенатом или DCCD, что указывает на потребность Δ μ H + в поглощении K + .

        При гиперосмотическом стрессе в присутствии глюкозы при pH 5,5 штамм E. coli дикого типа, выращенный при pH 5,5, экструдировал H + и накапливал K + (рис. 2). Отток H + был немного ниже, а приток K + устранялся протонофором CCCP (рис. 2). Эта картина также наблюдалась с мутантным штаммом TK1110 (дефектным по Kdp и TrkA, но с функциональной системой Kup; данные не показаны). Кроме того, общая и нечувствительная к DCCD АТФазная активность мембранных везикул этих бактерий не изменилась с помощью [K + ] ex (таблица 1), что подтверждает предыдущее открытие Δ μ H + -приводимое, но не АТФ-зависимое поглощение K + Купом в E.coli [3].

        2

        Кинетика экструзии H + и поглощения K + E. coli FRAG5, выращенных в ферментативных условиях при pH 5,5. Бактерии подвергались гиперосмотическому стрессу при pH 5,5 (см. Раздел 2), 22 мМ глюкозы (G) добавляли в нулевое время. Изменения в [H + ] ex (♦,?) И [K + ] ex (▴, ​​•) были откалиброваны, как описано в разделе 2. 1 мкМ CCCP присутствовал в смеси для анализа в отдельные эксперименты (?, •).В других см. Легенды к рис. 1.

        2

        Кинетика экструзии H + и поглощения K + E. coli FRAG5, выращиваемых в ферментативных условиях при pH 5,5. Бактерии подвергались гиперосмотическому стрессу при pH 5,5 (см. Раздел 2), 22 мМ глюкозы (G) добавляли в нулевое время. Изменения в [H + ] ex (♦,?) И [K + ] ex (▴, ​​•) были откалиброваны, как описано в разделе 2. 1 мкМ CCCP присутствовал в смеси для анализа в отдельные эксперименты (?, •).В остальных см. Условные обозначения к рис. 1.

        1

        АТФазная активность мембранных везикул E. coli TK1110, выращенных в ферментативных условиях при pH 5,5

        9

        4

        Условия АТФазная активность (нмоль P i мин -1 на мг белка)
        Всего + DCCD
        K + -свободная смесь 590 400
        100 мМ K + 650
        Условия АТФазная активность (нмоль P i мин −1 на мг белка)
        Всего + DCCD
        K + -1154
        100 мМ K + 650 430
        1

        АТФазная активность m эмбрановые везикулы E.coli TK1110, выращенный в ферментативных условиях при pH 5,5

        53 + DC
        Условия АТФазная активность (нмоль P i мин -1 на мг белка)
        Всего
        K + -свободная смесь 590 400
        100 мМ K + 650 430
        53 9115 9115 M
        Активность мин −1 на мг белка)
        Всего + DCCD
        K + -свободная смесь 590 400 650 430

        Значение Δ μ H + в E.coli , выращенный при pH 5,5, определяли с использованием соответствующих зондов (см. раздел 2). Δ Ψ составляло -71 мВ, а ΔpH составляло 0,65, обеспечивая значение движущей силы протонов -111 мВ, когда [pH] в было почти 6,1 (рис. 1). Это значение [pH] в (∼6,2) было подтверждено распределением салициловой кислоты (см. Раздел 2.4). Величина Δ μ H + была близка к значениям с E. coli в среде в диапазоне pH от 5,0 до 6,0, сообщенным Trchounian et al.[14]. Кислый [pH] в с E. coli , выращенной при низком pH, был предложен Кобаяши [15]. Таким образом, эта сила, по-видимому, может управлять значительным накоплением K + Kup при pH 5,5, если последний действует как K + –H + -симпортер.

        3.2 Связывание между притоками H

        + и K + в E. coli при гиперосмотическом стрессе при низком pH

        Чтобы установить связь поглощения K + Kup с циркуляцией H + через мембрану, было изучено влияние [K + ] ex на отток H + (рис.3). Чтобы исключить влияние [K + ] ex на отток H + через АТФазу F 0 F 1 [2], этот эксперимент проводили в присутствии DCCD. 2 мМ K + , добавленные в смесь для анализа без K + (сопутствующий K + был примерно 0,02 мМ [5]), приводил к притоку K + (не показан) и вызывал заметное снижение (∼ 24%) в оттоке H + (рис. 3) интактными клетками и протопластами штамма E. coli дикого типа.Это давало соотношение 1: 1 притоков K + к H + (данные не показаны). Эффект [K + ] ex на отток H + наблюдался с мутантом TK1110 (рис. 3), но не с мутантом TK1001, дефектным по Kdp и Kup, но имеющим активную систему TrkA (данные не показаны. ). Эти данные подтверждают, что Куп отвечает за приток K + в используемых условиях. Отношение притока K + к H + посредством TK1110 было постоянным для различных [K + ] ex (Таблица 2).В TK1001 [K + ] ex вызвал некоторое начальное увеличение (~ 13%) оттока H + (которое ингибировалось DCCD), что можно объяснить тесной взаимосвязью оттока H + через F 0 F 1 с поглощением K + TrkA, как предложено [8], следует учитывать относительно низкую активность TrkA. Повышенная продукция кислот ферментации [K + ] ex в этих условиях, вероятно, была исключена из-за отсутствия увеличения оттока H + в присутствии DCCD (данные не показаны).Уменьшение производства кислот TK1001 представляло интерес, который следует объяснить в дальнейшем исследовании.

        3

        Влияние [K + ] ex на отток H + штаммом E. coli дикого типа FRAG5 (♦) и мутантом TK1110 (?), Имеющим функциональную систему Kup, они были выращены в ферментативных условиях при pH 5,5. 2 мМ KCl (K + ) добавляли в смесь для анализа без K + , содержащую 100 мМ трис-фосфат, pH 5.5, DCCD составлял 0,1 мМ (см. Раздел 2). В других случаях см. Легенды к рис. 1.

        3

        Влияние [K + ] ex на отток H + штаммом E. coli дикого типа FRAG5 (♦) и мутант TK1110 (?), имеющий функциональную систему Kup, выращивали в ферментативных условиях при pH 5,5. 2 мМ KCl (K + ) добавляли в смесь для анализа без K + , содержащую 100 мМ трис-фосфат, pH 5,5, DCCD составлял 0,1 мМ (см. Раздел 2).В остальных см. Условные обозначения к рис. 1.

        2

        Соотношение притоков K + к H + E. coli TK1110, выращенных в ферментативных условиях при pH 5,5

        23 0,12 23 0,12
        [K + ] ex (мМ) Потоки ионов ммоль мин −1 на 10 12 клеток) a Отношение K + к H + приток
        K + H 11 + b
        0.5 0,07 0,07 1,0
        1 0,10 0,11 0,9
        2 0,12 0,14 0,12 0,14 0,8
        из K1153 к H + приток 23 0,12 23 0,12
        [K + ] ex (мМ) Потоки ионов (ммоль мин -1 на 10 12 ячеек) a
        K + H + b
        0.5 0,07 0,07 1,0
        1 0,10 0,11 0,9
        2 0,12 0,14 0,12 0,14 0,8
        2

        Отношение притока K + к H + притоками E. coli TK1110, выращенных в ферментативных условиях при pH 5,5

        23 0,12 23 0,12
        [K + 14] M ex ) Потоки ионов (ммоль мин. −1 на 10 12 ячеек) a Отношение K + к H + приток
        K 9177 + + + b
        0.5 0,07 0,07 1,0
        1 0,10 0,11 0,9
        2 0,12 0,14 0,12 0,14 0,8
        из K1153 к H + приток 23 0,23 0,12
        [K + ] ex (мМ) Потоки ионов (ммоль мин -1 на 10 12 ячеек) a
        K + H + b
        0.5 0,07 0,07 1,0
        1 0,10 0,11 0,9
        2 0,12 0,14 0,12 0,14 0,8

        Результаты указывают на связь притока K + посредством Купа с притоком H + , предполагая, что Куп, вероятно, будет действовать как H + –K + -симпортер.Если это так, приток этих ионов может компенсировать некоторый отток H + через протонный насос и ферментационные кислоты и (или) движение других ионов через мембрану.

        Сокращения

          Сокращения

        • F 0 F 1

          H + -транслоцирующая АТФ-синтаза

        • TrkA

          Kup, конститутивное низкоаффинное поглощение K E.coli

        • Kdp

          индуцибельная система захвата с высоким сродством K + в E. coli

        • AA

        • CCCP

          карбонилцианид

          004

          хлорфенцианид

          N, N ′ -дициклогексилкарбодиимид

        • TPP +

          катион тетрафенилфосфония

        • [K + ] ex 9000 9000 + ex 9000 + ex

          ] ex

          внешняя H + концентрация

        • Δ μ H +

          трансмембранный протонный электрохимический градиент

        • Δ000 Ψ 5 9000 9000 9184 9184 9184 9000 9184 9189

          трансмембранный градиент pH

        • [pH] 9 0213 выход

        • [pH] дюйм

        Благодарности

        Мы благодарим Х.Кобаяши и В. Эпштейна для штаммов, использованных в настоящем исследовании. Работа поддержана грантом 00-263 Министерства образования и науки Армении.

        Список литературы

        [1]

        (

        1993

        )

        Несколько механизмов, ролей и средств контроля транспорта K + в Escherichia coli

        .

        Biochem. Soc. Пер.

        21

        ,

        1006

        1010

        . [2]

        (

        1997

        )

        Ионный обмен у факультативных анаэробов: существует ли протонно-калиевый насос в Escherichia coli

        .

        Анаэроб

        3

        ,

        355

        371

        . [3]

        (

        1999

        )

        Kup является основной системой поглощения K + в Escherichia coli при гиперосмотическом стрессе при низком pH

        .

        FEBS Lett.

        447

        ,

        144

        148

        . [4]

        (

        1993

        )

        Исследования нуклеотидной последовательности и делеции 3′-конца показывают, что K + захватывающий белок Kup из Escherichia coli состоит из гидрофобного ядра, связанного с большим и частично важным гидрофильным С-концом

        .

        J. Bacteriol.

        175

        ,

        6925

        6931

        . [5]

        (

        1977

        )

        Энергетическая связь с сетью K + транспорт в Escherichia coli K12

        .

        J. Biol. Chem.

        252

        ,

        1394

        1401

        . [6]

        (

        1976

        )

        Перенос катионов в Escherichia coli . VIII. Транспортные мутанты калия

        .

        J. Gen. Physiol.

        67

        ,

        325

        341

        . [7]

        (

        1977

        )

        Дискриминация между Rb + и K + со стороны Escherichia coli

        .

        Биохим. Биофиз. Acta

        469

        ,

        45

        51

        . [8]

        (

        1998

        )

        Связь между системой захвата ионов калия Escherichia coli TrkA и F 0 F 1 -АТФаза в условиях роста без аэробного и анаэробного дыхания

        .

        Biosci. Реп.

        18

        ,

        143

        154

        . [9]

        (

        1973

        )

        Анаэробный транспорт в мембранных пузырьках Escherichia coli

        .

        Proc. Natl. Акад. Sci. США

        70

        ,

        3376

        3381

        . [10]

        (

        1989

        )

        Формирование ионно-транспортного суперкомплекса в Escherichia coli . Экспериментальная модель прямого преобразования энергии

        .

        FEBS Lett.

        246

        ,

        149

        152

        . [11]

        (

        1994

        )

        Взаимосвязь между F 0 F 1 -АТФазой и транспортной системой K + внутри мембраны анаэробно выращенной Escherichia coli , выращенной в анаэробных условиях. N, N ‘-дициклогексилкарбодиимид-чувствительная активность АТФазы у мутантов trk

        .

        J. Bioenerg. Биомембр.

        26

        ,

        563

        571

        .[12]

        (

        1977

        )

        Функциональный мозаицизм мембранных белков в везикулах Escherichia coli

        .

        J. Bacteriol.

        129

        ,

        959

        966

        . [13]

        (

        1983

        )

        Исследование внутриклеточного pH в Escherichia coli с помощью измерений флуоресценции 9-аминоакридина

        .

        FEMS Microbiol. Lett.

        20

        ,

        41

        45

        .[14]

        (

        1987

        )

        Энергозависимое поглощение K + и обмен H + -K + в Salmonella typhimurium

        .

        Bioelectrochem. Биоэнерг.

        17

        ,

        183

        192

        . [15]

        (

        2000

        )

        Почему у бактерий есть несколько транспортных систем для каждого вида ионов

        .

        Недавнее Рез. Dev. Биоэнерг.

        1

        ,

        33

        39

        .

        © 2001 Федерация европейских микробиологических обществ

        . Разное

        Добавить комментарий

        Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *